1,25-二羟基维生素d3对慢性实验性结肠炎小鼠th1、th17活化的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文1,25--二羟基维生素D3对慢性实验性结肠炎小鼠Th1、Th17活化的影响姓名：张红申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张晓岚201203中文摘要1,25(OH)2D3对慢性实验性结肠炎小鼠Thl、Thl7活化的影响摘要溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，UC)是炎症性肠病(inflammatoryboweldisease，roD)的一种，其发病机制尚不十分明确，一般认为是由包括感染在内的环境因素作用于易感倾向个体，诱发异常免疫反应所致。大量研究表明，免疫因素是其最基本的发病机制。CD4+T细胞的

2、T辅助(Thelper,Th)l／Thl7细胞具有促炎症生成的特点，在UC肠道免疫反应过程中的作用越来越得到重视。在各种抗原的刺激下，Thl／Thl7细胞的特异转录因子被激活，介导其发生免疫应答，继而分泌相关的细胞因子，如干扰素(interferon-7，IFN吖)，白介素．6(interleukin-6，IL．6)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-a，TNF．a)，白介素．17(interleukin．17，IL一17)等，这些细胞因子具有强大的募集和激活嗜中性粒细胞、调节细胞免疫应答、清除细胞内的病原体和诱导T细胞

3、活化等功能，进而诱导并促进炎症的发生，最终启动UC的发病。1，25．二羟基维生素D3(1，25一dihydroxyvitaminD3，1,25(OH)2D3)是维生素D(VitaminD，VitD)的活性代谢产物，属于开环甾类化合物激素。1,25(01-1)2D3除了调节钙和骨的代谢外，因免疫细胞中存在其受体(vitamineDreceptor，VDR)，故具有其相关的生物活性。维生素D通过与单个核细胞、巨噬细胞及致敏淋巴细胞等免疫细胞表面的VDR结合调节Th细胞，尤其是Thl／Thl7细胞的功能，进而抑制自身免疫性疾病的发展。VitD产生

4、和／或作用不足参与粘膜损伤的发生，使消化道感染的风险增高，增加UC发病的危险。大量研究表明，VitD缺乏与UC的发病有关，补充VitD可以降低UC的发病率。目的：探讨VitD对右旋葡聚糖硫酸钠(dextransodiumsulfate，DSS)诱导的慢性实验性结肠炎的治疗作用及其作用机制，以期为临床UC的维持治疗提供一种新的有效药物。方法：①30只雄性C57BL／6小鼠按随机数字表随机分入Control组、DSS组和DSS+VD组，每组lO只。Control组一直饮用蒸馏水；DSS组中文摘要和DSS+VD组间断饮用2％DSS，时间段为分别为

5、第1"--5天、第8"--'12天、第15"--"19天、第22--一26天、第27和第28天，其余时间饮用蒸馏水。造模第14天起开始治疗：DSS+VD组给予1,25(OH)2D3(O．2州25∥天)灌胃，治疗14天；Control组与DSS组给予等体积PBS灌胃14天作为对照，第29天处死小鼠。②每天观察小鼠精神状态、体重变化、活动情况、毛发光泽度、进食以及大便性状，并评估疾病活动指数(diseaseactivityindex，D触)。③观察结肠形态学变化，测量结肠长度，并计算结肠的形态学和病理学评分。④检测结肠组织髓过氧化物酶(myel

6、operoxidase，MPO)N含量。⑤检测各组小鼠血清钙的水平。⑥提取肠系膜淋巴结(mesentericlymphnodes，MEN)中的单个核细胞并计数，应用ELISA检测其上清液中的IL．17、n师．0【、IL．6和IFN-y的水平。⑦应用HE染色观察结肠组织的病理学改变。⑦应用免疫组织化学染色、Westernblot技术和real-timeQ．PCR技术分别检测结肠组织中IL。17、TNF．a、IL．6和IFN-^r蛋白及mRNA的表达水平。结果：①在慢性结肠炎小鼠模型中，与Control组相比较，DSS组小鼠体重明显下降(15．

7、5％4-1．50％w0．O％4-O．0％，P

8、态学评分升高(2．504-0．58Ⅷ0．004-0．00，P<0．05)，结肠病理学观察显示黏膜上皮缺损，浅溃疡生成，腺体破坏或消失，可见黏膜层、黏膜下层甚至肌层有大量炎症细胞浸