针刺对抑郁大鼠星形胶质细胞谷氨酸功能影响的研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名Et期：立u1q年5月_TY日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权

2、广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签论文导师签2—-m—4一日势岔叫({，年F月)j日孤摘要目的：本实验通过针刺改善慢性温和应激(chronicunpredictablemildstressCUMS)致抑郁模型大鼠和通过星形胶质细胞谷氨酸转运体拮抗剂致抑郁障碍大鼠星形胶质细胞谷氨酸的影响两个实验，来探讨针刺对抑郁大鼠星形胶质细胞谷氨酸功能的影响。该研究有别于以往针刺抗抑郁研究大多局限在信号转导通路

3、这一传统的研究思路，是针刺抗抑郁机理研究的热点新领域。实验一针刺对CUMS致抑郁模型大鼠星形胶质细胞谷氨酸功能影响的研究方法：将9-10周龄体重250-3009的成年雄性SD大鼠56只，随机分为4组：空白组(n=l1)、对照组(n=15)、针刺组(n=15)和药物组(n=15)；其中空白组大鼠不予任何处理，其余三组采用慢性不可预见性温和刺激联合孤养建立抑郁大鼠模型。对照组，造模成功后不予任何处理。针刺组，于造模成功后第二天开始进行针刺四关穴(合谷、太冲)治疗。治疗第1周每日1次，治疗第2周开始隔日1次，共治疗5周。药物组，于

4、造模成功后第二天开始给予利鲁唑灌胃治疗，每24小时1次(4mg／kg)，连续治疗5周。评价指标采用大鼠体质量和大鼠行为学指标。在造模前以及造模和治疗的第7、14、21、28、35天进行体质量测量、糖水偏好实验、509进食量作为检验造模和治疗成功与否的重要指标。运用透射电镜、免疫组化技术、Western—Blot、RT—PCR技术四组检测指标观察各组大鼠海马和前额皮质星形胶质细胞结构和形态，谷氨酰胺合成酶(GS)、前额皮质及海马星形角质细胞高亲和性兴奋性氨基酸转运体(EAATl、EAAT2)蛋白和基因表达的变化。采用SPSS2

5、0．0统计软件对实验数据进行统计分析，实验计量资料若服从正太分布，结果以均数±标准差(i±s)，各组间差异及比较采用单因素方差分析(One—ANOVA)最小显著差法(LSD)，以p

6、9进食量实验，证明慢性应激性温和刺激造模后，造模各组大鼠各项指标下降，出现抑郁症状，对照组与空白组比较有统计学意义，各造模组大鼠组间比较差异无统计学意义。在5周治疗完成后，对照组各项指标上升，抑郁症状好转，与空白组比较差异有统计学意义；与对照组比较，’针刺组和药物组各项指标上升，差异有统计学意义；针刺组与药物组比较，差异无统计学意义。2．透射电镜下观察针刺对CUMS致抑郁模型大鼠星形胶质细胞结构和形态的影响抑郁造模后，对照组、针刺组和药物组大鼠海马AST超微结构损伤，主要表现为胞质中粗面内质网明显扩张和线粒体的嵴疏松变，细胞

7、核固缩。海马(CAl区一CA3区)出现锥体细胞变性，数目减少，细胞质中的微丝、微管明显减少，线粒体致密及空泡化情况，DG区部分颗粒细胞胞浆空泡化直至细胞水肿或致密样改变，出现坏死和凋亡前期的变化。前额皮质出现胞质中粗面内质网明显扩张和线粒体的嵴疏松变，细胞核固缩，微丝、微管明显减少，线粒体致密及空泡化情况。空白组大鼠海马和前额皮质没有出现明显的超微结构损伤。在5周治疗完成后，针刺组，海马(CAl区-CA3区)锥体细胞均恢复正常，数目增多，微丝、微管增多，线粒体致密及空泡化情况有所改善，星形胶质细胞核固缩部分恢复；DG区部分颗

8、粒细胞、星形胶质细胞恢复正常。前额皮质颗粒细胞胞浆空泡化直至细胞水肿、致密样改变情况恢复，星形胶质细胞形态逐渐恢复。药物组，海马(CAl区一CA3区)锥体细胞均恢复正常，星形胶质细胞核固缩情况未见明显好转；DG区颗粒细胞恢复正常，星形胶质细胞恢复不明显。前额皮质胞质中粗面内质网扩张情况好转