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时间:2019-03-01
《麻黄碱对kcnq1kcne1通道的作用及结合位点的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、华中科技大学硕士学位论文麻黄碱对KCNQ1/KCNE1通道的作用及结合位点的研究姓名:罗岚申请学位级别:硕士专业:生物物理学指导教师:丁久平20070517华中科技大学硕士学位论文摘要离子通道是细胞膜上的蛋白质孔道,离子的跨膜流动是细胞传递信息的基础。钾通道是一类普遍存在的膜蛋白,在很多的生理过程中扮演着极为重要的角色。KCNQ基因编码的是一个电压依赖的钾离子通道家族。KCNQ1(Kv7.1)α亚基和KCNE1β亚基共同装配成的通道能产生类似心脏的慢激活延时整流电流。麻黄碱是中药麻黄中的重要成分,而伪麻黄碱则是它的旋光异构体。麻黄碱是拟肾上腺素类药物,可作用于
2、心脏,使血压升高,冠状血管扩张,加强心肌收缩力,心输出量增加,但心率变化不大。非洲爪蟾卵母细胞可异源表达KCNQ1/KCNE1通道,并用双电极电压钳技术记录通道电流。在排除卵母细胞内源性通道和KCNE1通道的干扰下,在+40mV时,1µM麻黄碱可明显增大KCNQ1/KCNE1通道的电流幅值。激活作用发生迅速,在换液2分钟后激活水平就能保持稳定。这可从分子水平上解释麻黄碱对心脏的作用机制,同时也能推断出由于麻黄碱副作用引起服用者猝死的药物作用机制。位点F296和Y299在KCNQ1/KCNE1通道在孔区附近,它们是麻黄碱的结合位点。当它们分别突变成F296V和Y
3、299V时,分别检测麻黄碱对F296V/KCNE1和Y299V/KCNE1的作用。发现麻黄碱对突变后的通道基本没有作用。麻黄碱是通过自身苯环上的大π键和F296和Y299位氨基酸苯环上的大π键相互作用,改变孔区的构象,使离子容易通过离子通道,电流幅值变大。关键词:KCNQ1/KCNE1通道麻黄碱伪麻黄碱突变双电极电压钳非洲爪蟾卵母细胞I华中科技大学硕士学位论文AbstractIonchannelsareporeproteinsofcellularmembraneandtheionflowisthebasisofsignaltransferringamongdi
4、fferentcells.Potassiumchannelisapopularbranchofmembraneproteinwhichplaysveryimportantrolesinmanyphysiologicalactivities.KCNQgeneisafamilyofthegenesencodingvoltage-dependentpotassiumchannels.KCNQ1(KV7.1)α-subunitsandKCNE1β-subunitco-assembletoformchannelsthat+conducttheslowdelayedrec
5、tifierKcurrent(IKs)intheheart.EphedrinewhichissimilartotheadrenalineisamaincomponentofthetraditionalChinesemedicineMahuang,andpseudoephedrineisephedrineopticallyactiveisomer.Whenephedrineworksontheheart,thebloodpressurerises,thecoronaryvesselsexpands,andthemyocardialcontractileforce
6、strengthenssotheheartcanpumpmorebloodwithouttheheartratechangingmuch.KCNQ1/KCNE1channelswereheterologouslyexpressedinXenopuslaevisoocytesandcurrentswererecordedusingthetwo-microelectrodevoltage-clamptechnique.EliminatingtheinterfereofKCNE1channelsandthenativechannelsintheooxytes,1µM
7、EphedrineincreasedtheKCNQ1/KCNE1currentsamplitude,at+40mV.Besides,theactivationoccurredrapidly,withasteadylevelachievedin2minutesafterthereplacementofbathsolution.Ourstudyexplainsthathowephedrineworksontheheartandthemechanismofthesuddendeathduetothesidereactionofephedrine.Thetworesi
8、dues,F296andY299,lo
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