KV通道对大鼠胰岛素分泌作用的研究.pdf

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1、中西医结合心脑血管病杂志2014年5月第12卷第5期·6O1·[J]．AmJChinMed，2011，39(2)：315—324．～一口一～一口一一～口～一口一一一～一～幻口～一～一[15]LiangJQ，WuK，JiaZH，eta1．ChinesemedicineTongxinluorood—ulatesvascularendothelialfunctionbyinducingeNOSexpressionviathePI一3K／Akt／HIF—dependentsignalingpathwayfiJ]．JEthnopharmacol，2011，133(2)：517—523．

2、[16]JiangMH，KakuT，HadaJ，eta1．DifferenteffectsofeNOSandnNOSinhibitionontransientforebrainischemiaEJI．BrainRes，2002，946(1)：139—147．作者简介：卢园，女，硕士研究生，现就读于南京医科大学附属杭州医院(邮编：210029)；蒋敏海(通讯作者)，工作于南京医科大学附属杭州市第一人民医院(邮编：310006)。(收稿日期：2014—03—10)(本文编辑王雅洁)一一K一V～通一一道～对～大～～鼠一胰岛素分泌作用的研究郭庆，李小东，高憬英，张琬，壬慧，刘云峰，章

3、毅摘要：目的研究电压依赖性钾通道(KV)在大鼠胰岛素分泌中发挥的作用，为糖尿病的治疗提供理论依据。方法用胶原酶P消化胰腺，经过Histopaque1077梯度离心后，在体式显微镜下分离得大鼠胰岛。用吖啶橙一碘化丙啶(AO／PI)染色和胰岛素分泌实验来验证胰岛活性与功能，通过膜片钳技术记录KV电流和动作电位(AP)时程对大鼠胰岛素分泌的作用机制。结果分离获得的胰岛95被AO／PI染成绿色；2．8mmol／I⋯83mmol／L葡萄糖情况下胰岛素分泌量分别是：(6．4±0．5)／~IU／mL、(13．7±2．0)uIU／mL；TEA、MDL一12330A在8．3mmol／L葡萄糖的

4、基础上进一步增加了胰岛素分泌，抑制了KV电流，延长了AP时程，而在同样条件下H89对胰岛素分泌、KV电流、AP时程均没有影响。结论采用胶原酶P消化法及Histopaque1077分离液离心分得的胰岛活性、功能良好，通过抑制8细胞KV电流延长AP时程，增加胰岛素分泌。关键词：胰岛素；电压依赖性钾通道；动作电位；大鼠中图分类号：R285．5R587．1文献标识码：Adoi：10．3969／j．issr~1672—1349．2014．05．044文章编号：1672—1349(2014)05—0601—03糖尿病是目前临床上常见疾病，它是继心血管疾病及癌症Amresco)；AO—PI

5、试剂盒(南京建成生物科技有限公司)；胰岛之后危害人类健康的第三大疾患_1]。并且在全部心脑血管病死素检测试剂盒(北京北方生物技术研究所)。亡的病例中，有13的病例与高血糖有关，高血压合并糖尿病1．3主要仪器体式显微镜(上海中恒仪器有限公司)；电子天成为脑卒中死亡的重要原因[z3。目前临床上使用的促胰岛素分平(上海精密仪器有限公司)；倒置显微镜(日本OLYMPUS)；泌剂大都是通过抑制G细胞KATP通道的开放，引起细胞膜的细胞培养箱(北京博奥恒信生物科技有限公司)；Narishige去极化和Ca通道开放，最终导致胰岛素释放_3]。然而此种促MODEIPP一830电极拉制仪、MI

6、ROFORGEMF一830抛光胰岛素分泌机制绕过了细胞内葡萄糖这一环节，长期给药容易仪(日本Narishige)；台式离心机(长沙湘仪仪器有限公司)；造成持续过度的胰岛素分泌而引起低血糖等副反应]。因此研EPC10全自动膜片钳(德国HEKA)。发具有葡萄糖依赖性的促胰岛素分泌剂具有重要的意义。电压1．4方法依赖性钾通道(KV)在葡萄糖依赖性的促胰岛素分泌过程中起1．4．1大鼠胰岛、细胞的分离与培养大鼠断头处死，用1着重要作用]。mg／mL胶原酶P溶液(1640培养基溶解)，消化胰腺分得胰岛，1材料与方法放入37℃，5CO。的细胞培养箱中培养。分细胞时使用51．1动物雄性SD大

7、鼠，由山西医科大学实验动物中心提mg／mLDispaseII酶液消化胰岛，将细胞悬浮液接种在含多聚供，体重230g～270g赖氨酸的盖玻片上，加培养液放培养箱中培养l_6]。1．2试剂胶原酶P、BSA(瑞士Roche)；MDL一12330A、1．4．2大鼠胰岛的AO／PI活性鉴定用Hanks液配AO：670HEPES、葡萄糖、D一多聚赖氨酸(美国Sigma)；H89、TEA(美国／~mol／L，PI：750／lmol／L，4℃避光保存，取lOLAO与1mLCaymanChemica1)；1640培养基(