缺氧诱导因子--1α调控scfc--kit途径在肢端黑素瘤发病机制中的作用研究

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1、学校代码:10023学号:B2012017009博士学位论文缺氧诱导因子.1仅调控SCF/c.kit途径在肢端黑素瘤发病机制中的作用研究所院:姓名:指导教师:导师小组:学科方向:研究方向:完成日期:皮肤病研究所周璐孙建方教授陈浩副教授冯素英教授皮肤病与性病学皮肤病理学2014年5月秀协修和Code:10023ADissertationforDoctorateDegreeTheeffectofhypoxia—induciblefactor-letregulatingSCF/c—kitpathwayinthepa

2、thogenesisofacralmelanomaByZhouLUUndertheSupervisionofProf.SunJian-fangInstituteofDermatologyChineseAcademyofMedicalSciencesPekingUnionMedicalCollegeMay,2014目录英文缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1全文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66日Ⅱ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一章中国人群皮肤恶性肢端黑素瘤中c-KIT基因的表达及突变的分析摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l8讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30第二章缺氧诱导因子.1Q在恶性肢端黑素瘤中的表达及其与SCF/c.kit途径的联系摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42第三章构建稳定过表达c.KIT野生型和突变型基因的黑素瘤细胞株摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44第一节慢病毒干扰载体的构建材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49第二节慢病毒包装与滴度检测材料与方法⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62第三节c-KITWT、L576P、K642E.慢病毒载体感染人A375细胞379O1291678●IJ●●rI●~况~●!●●JjF●~~情~●●,J●=

7、d√●~~动~●●■■E●~~活~.L●.●●■■■『●~~术~●!●:~~学~●●Hj●~~加~●:~~参~●r●●_j,●~~及~●.L.●.b=f.~~章~●l_●~~文~●●●J●..●pn.~~的~●■:●●I,●~~表~

8、法~~发~方~~献结~问~与~~文小~期~料果论考文述读谢材结讨参全综在致中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文英文缩略词中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文2中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文全文摘要皮肤恶性黑素瘤(cutaneousmalignantmelanoma,CMM)是一种高度恶性的皮肤肿瘤,致死率高,肢端黑素瘤是亚洲人种肿瘤的主要临床亚型,而肢端黑素瘤中常存在c.KIT基因L576P和K642E等点突变位点,提示基因突变与肿瘤形成可能相关;另一方面,肿瘤位于肢端,提示其发生可能与肢端

9、的缺氧微环境相关,而组织缺氧是肿瘤微环境基本特征之一,与肿瘤的发生、发展有关。(一)中国人群皮肤恶性肢端黑素瘤中c.ⅪT基因的表达及突变的分析我们采用免疫组织化学染色、PCR及基因测序等方法,从我院2010年1月.2013年6月期间诊断的中国人群黑素瘤患者的石蜡包埋组织中提取基因组DNA,并进行c.KIT基因第11、13、17号外显子序列的扩增、测序。93例肢端CMM患者中检测到4例患者出现c.KI

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