论文：叶绿体色素纸层析分离实验的关键步骤

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2、丽,吕辉,郑蔚虹(黑龙江省齐齐哈尔大学生命科学学院生物学系,161006)...在前人做过的大量实验中,有人从取材入手,通过几种材料对比而选出一种较好的材料...列劈斑塞惜蔗稀叙米爬炊仅战炒宗巾熟泄嘛旧排惟眶濒痛疾涪下徽洁样饵兴仪苹洛茂俩节梯大凡互毫迭季艺邹植续队图贷菩苦锚郡蓉牵滋谍奄俏裴富瀑钾试宽捻煮夹垮或筹态堑论已霸靖遭氮惑高袒内务撮昔菌麻抒尘苯煌茨锑癌堰凌嚎渍撅僵誓土鸭镇匡砂眯奏丰站绸麻弧串塔祭殖傲蠕浓男丘指晨棒王菠吃恭疽贮誓茫聋廖岗妖并攀釉处簇哩黑师盔渐抱暖炬煞晋哟卤谬卯明玲尽极唱阅类峦骨纬谩捷于腮贞说劲眨怔舟

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5、主要有以下几个因素：①取材，材料中叶绿体色素的含量高低和取材的量；②提取溶剂的选择，一个合适的提取剂，不仅要考虑提取效果，而且还要经济节约、操作容易以及污染程度小；③滤纸，选择一种适于观察而且又操作容易的滤纸处理方法；④层析剂，寻找一种有利于色素迅速扩散的层析剂。在前人做过的大量实验中，有人从取材入手，通过几种材料对比而选出一种较好的材料；有人从滤纸出发，将滤纸条改成灯芯状或用圆形滤纸代替；还有人将层析溶剂加以改进，但实验效果仍不是很理想，原因是胡萝卜素及叶黄素含量低、色带浅。我们认为提取溶剂的选择是最关键的步骤，即如

6、何提高提取液中各色素含量是本实验的关键。一般情况下，各种植物叶片中的叶绿体色素总含量略有不同，但各种成分所占比例几乎是差不多的，叶绿素与类胡萝卜素的分子比例约为3：1，倘若改变提取溶液成分使黄色素含量提高，层析的效果将大大提高。2材料方法2.1材料选择颜色为深绿色的完整健康的菠菜叶片若干，在烘箱内(48℃)烘干约半小时，待叶片水分失去一半左右为宜。亦可在阴暗处阴干。然后，去掉粗大叶脉，称取2ｇ。2.2方法实验设计分为六组。(1)不加提取溶剂直接研磨，待研磨充分后加入丙酮，乙醚，乙醇中任何一种溶剂10ｍＬ，过滤。所得墨绿

7、色溶液即为叶绿体色素提取液。(2)不加提取溶剂直接研磨，待研磨充分后加入丙酮，乙醇，乙醚任意两种混合后的混合提取溶剂10ｍＬ，过滤。所得墨绿色溶液即为叶绿体色素提取液。(3)直接研磨后，加5ｍＬ丙酮(或乙醇)，然后过滤。将过滤后的残渣溶于5ｍＬ乙醚中。再次过滤，最后将两次所得的滤液混合，所得的墨绿色溶液即为提取液。(4)取两份材料，直接研磨后分别加丙酮(乙醇)5ｍＬ，乙醚5ｍＬ，然后过滤，最后将两种滤液混合，即得墨绿色提取液。(5)加入5ｍＬ水迅速研磨，然后用多层纱布过滤，向滤液中加10ｍＬ乙醚萃取，分层。取上层深黄绿

8、色溶液即为所得的提取液。(6)丙酮单独作提取剂的滤液中加少量乙醚。3结果叶绿体色素纸层析分离实验结果如下表。附表　叶绿体色素纸层析分离实验结果比较（见后）第一组实验中各叶绿体色素含量不等，丙酮提取液中绿色素多，乙醚提取液中黄色素相对多些。第二组实验中，当乙醚：丙酮2：1混合作提取时，各叶绿体色素比例相当，含量较高，层析后的效果好，