龙葵碱诱导裸鼠胰腺癌凋亡的实验研究

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1、温州医学院硕士学位论文龙葵碱诱导裸鼠胰腺癌凋亡的实验研究姓名：张青顺申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：周蒙滔2012-05-24温州医学院硕士学位论文龙葵碱诱导裸鼠胰腺癌凋亡的实验研究中文摘要目的：通过建立胰腺癌裸鼠肿瘤模型，采用不同浓度的龙葵碱(Solanine)作用人胰腺癌裸鼠肿瘤模型，观察龙葵碱对胰腺癌裸鼠肿瘤模型的生长抑制和凋亡作用。并通过检测不同浓度龙葵碱作用于裸鼠模型后其瘤体大小变化，以及相关指标Bcl．2、BaX和Caspase．3的变化，探讨龙葵碱诱导胰腺癌凋亡与Bcl．2、Ba

2、X和Caspase．3的表达的关系，以及在龙葵碱诱导细胰腺癌凋亡机制中的作用。方法：通过细胞培养将对数生长期人胰腺癌SWl990细胞接种至裸鼠，待肿瘤接种成功后，将裸鼠随机分成对照组，实验组1，实验组2共计3组(n=lO)，肿瘤接种成功后2周，分别给予同体积含1％oDMSO的1640培养液，龙葵碱5mg／l【g，龙葵碱10mg／kg，经腹腔内注射，隔天给药一次，共计2周。每次给药结束，用游标卡尺记录肿瘤大小：2周后颈椎脱臼处死模型，取下肿瘤组织称重记录，通过其重量计算龙葵碱的抑瘤率；将同一肿瘤组织分成

3、2份分别用实时荧光定量PCR和免疫组化测定Bcl．2、Caspase．3和BaX的表达变化。实时荧光定量PCR结果通过使用7500systemSDSsoftware软件分析PCR过程中样本的CT(Thresholdcycle)值，每个标本设2个复孔，重复3次试验，计算平均Ct值，每一次反应均设定阴性对照。采用2一“Ct计算各目的基因相对反应起始拷贝数，以GAPDH为内参。免疫组化采用观察5个连续切片，选癌细胞密集处的400倍视野计数平均100个细胞中阳性细胞小于25％为阴性，大于25％为阳性。结果：龙

4、葵碱显著抑制人胰腺癌肿瘤生长，并具有时间和浓度依赖性。1．游标卡尺记录肿瘤生长的变化及抑瘤率的计算通过游标卡尺记录发现对照组的瘤体的生长在整个实验过程中处于一个逐步上升的趋势，试验组1的记录值发现，试验组1动物瘤体的生长明显慢于对照组，实验组2的记录值发现，其瘤的生长处于一个不生长或者非常缓慢的状态，一部分瘤体甚至缩小。最后通过测瘤体重量计算抑瘤率与对照组裸鼠瘤重(1．35±O．314)g相比，实验1组瘤重(1．127+__0．257)g降低无显著意义，抑瘤率仅为16．52％；实验2组裸鼠瘤重f0．9

5、26±0．352)g明显降低(P

6、肿瘤凋亡的作用，并具有浓度依赖性。(3)龙葵碱诱导人胰腺癌凋亡的机制可能与上调BaX、Caspase．3基因和下调Bcl．2基因有关。关键词：龙葵碱；胰腺癌；凋亡，Bcl一2；Bax，caspase．3温州医学院硕士学位论文AStudyonTheEffectofSolanine0UApoptosisofHumanPancreaticCancerimplantedonnudemiceAbstractObjeetive：Toinvestigatetheapoptosiseffectofsolanineto

7、humanpancreaticcancercellsimplantedonnudemice．weusingdifferentconcentrationsofsolanine，thispaperstudiestheinhibitoryeffectsofsolanineonPCfrommorphologicalstructure，inhibitionrateandapoptosisrateofcellswhichprovideclinicalapplicationwiththeoreticalbasis．

8、Thenbytestingthevariationofcaspase-3，Bcl-2andBaxeffectedbydifferentsolanineconcentrations，thispapershowstherelationshipbetweentheexpressionofcaspase-3，Bcl-2andBaxinducedbysolanine，todiscussthefunctionofcaspase-3，Bcl-2andBaxinindu