结肠炎大鼠模型

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1、4.1材料与方法4.1.1材料（一）实验试剂2，4，6-三硝基苯磺酸购于Sigma公司（二）实验仪器同第三章；FCOM-6124型半自动生化分析仪，德国倍肯公司（三）实验日粮组成与营养水平基础日粮按照NRC(1998)营养标准配制，如表4-1。（四）实验动物SD大鼠购于哈尔滨医科大学实验动物中心。4.1.2方法（一）实验动物分组与处理选取体重220±10g的SD大鼠400只，雌雄各半，分别采用醋酸和TNBS/乙醇两种方法复制大鼠结肠炎模型。动物饲养于空调室内，室温20±2℃，相对湿度40%-50%，基础日

2、粮如表4-1，颗粒饲料喂养，自由饮水。将大鼠随机分为4组：Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组。Ⅰ组和Ⅱ组造模前饲喂4周鱼油（0.5%的鱼油）后，Ⅰ组继续饲喂含0.5%鱼油日粮，而Ⅱ组饲喂基础日粮；Ⅲ组在造模后饲喂含0.5%鱼油日粮，而Ⅳ组造模后饲喂基础日粮。（二）大鼠结肠炎模型的建立通过广泛文献检索和多次预实验结果，我们选取醋酸和2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法两种方法建立结肠炎大鼠实验模型。醋酸模型的建立参考文献[140-142]3/3，大鼠禁食不禁水24h，乙醚轻微麻醉后，用外径为2mm的硅胶管插入大鼠肛门内

3、约8cm，经管内注入10%的醋酸溶液2ml，10-20s后注入生理盐水5ml以消除醋酸的作用，自然清醒后放回笼内正常饲养。TNBS/乙醇模型的建立参考文献[143]复制大鼠结肠炎模型，大鼠禁食不禁水24h，乙醚轻微麻醉后，用外径为2mm的硅胶管插入大鼠肛门内约8cm，经管内注入TNBS/50%乙醇溶液0.85ml，倒立30s，捏紧肛门平放5min即可，自然清醒后放回笼内正常饲养，实验期为28d。（三）样品的采集与处理分别于模型复制成功第24h、7d、14d和28d后称重、无菌采取血液后处死大鼠。大鼠处死后

4、，迅速剖取结肠，摘取距肛门6-8cm病变处结肠4-7cm，用于结肠黏膜损伤的观察和结肠病理学变化的观察。沿肠系膜纵轴剪开肠腔，冰生理盐水冲洗干净后将肠黏膜向上平铺于平板上，大头针固定后，用放大镜观察炎症及溃疡发生情况（进行肠道黏膜损伤评分观察）。将采取的部分结肠组织，固定、石蜡包埋，病理切片（HE染色），显微镜下观察大鼠结肠病理学变化情况（四）观察指标（1）结肠炎大鼠炎症的观察观察记录大鼠体重、饮食、粪便性状、死亡率、稀便发生率、皮毛、活动等情况。同时采取粪便测定潜血情况（联苯胺冰醋酸法），综合体重、粪便

5、性状及隐血情况对大鼠疾病活动指数（TheDiseaseActivityIndex，DAI）进行评分[144]（表4-2）；肉眼观察结肠黏膜损伤大体情况，参考结肠黏膜损伤程度评分标准[145-148]（表4-3）；结肠组织HE染色后光镜下观察结肠组织损伤情况，参考肠组织学损伤评分标准[149-150]（表4-4）。表4-2DAI评分标准Table4-2ThestandardsofDAIscore评分体重减轻(%)粪便性状粪潜血0(–)正常正常11–525–10松软潜血(+)311–154>15稀便肉眼潜血附

6、：粪便性状评分标准(1)正常粪便：成形颗粒样粪便；3/3(2)松软粪便：不豁附于肛门的糊状、半成形粪便；(3)稀便：可豁附于肛门的稀水样便表4-3结肠黏膜损伤程度评分标准Table4-3Thestandardsofcolonicmucosalinjuryscore评分大体形态0黏膜无水肿、充血及溃疡，肠壁无粘连及增生1轻度的黏膜水肿、充血、无溃疡2黏膜充血、水肿、糜烂、无溃疡3黏膜充血、水肿、糜烂、单个溃疡4黏膜充血、水肿、糜烂、多个溃疡5黏膜充血、水肿、重度糜烂、多个溃疡，有>1cm2溃疡（4）数据处理

7、实验结果以xx±S表示，数据统计分析采用SPSS11.5软件进行数据处理。3/3