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1、痛泻二草方对溃疡性结肠炎模型大鼠血清IL.freelandNO,NOSinintestinalmucosatissueofratsechanismof'restoreingulcerofTXECF.MethodsUlcerativecolitismodelmunizationandstimulusmethodpartly.50ratsly：normalgroup,modelgroup,TXECFgroup,Tongxieyaofang(TXYF)group,BupiyichangandNO,NOSinintest
2、inalmucosatissueodelgroup,IL-2inserumuchloalgroup(P0.01),NOandNOSuchhigherthanthoseofnormalgroup(P0.01,P0.05).paredodelgroup,TXECFcouldnotonlyincreaseIL-2(P0.05),butalsodecreaseNOandNOSinintestinalmucosatissuesignificantly(P0.01,P0.05).ConclusionTXECFhasfunct
3、ionsofadjustingimmunefunction,regulatingmucosalbloodflomatoryreactionandrestoreingulcer.Keyin,煎煮滤过,95℃水浴浓缩(使痛泻二草方每毫升含原药材1.1g；痛泻要方每毫升含原药材0.5g)。药物制成后,高压灭菌消毒分装,4℃冰箱保存备用。IL-2放射免疫分析药盒,批号20051125,北京科美东雅生物技术有限公司；完全弗氏佐剂：批号20050923,Sigma公司,北京拜尔迪生物技术有限公司。NO测试盒,批号200511
4、22；NOS测试盒,批号20051201；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒,批号20051218。均由南京建成医学生物研究所提供。DF110型电子分析天平、721型可见光分光光度计、XYJ80-2离心机、HH-4数显恒温水浴箱、FT-630G微机多探头r计数器、KDC-2044低速冷冻离心机。2实验方法2.1动物分组及造模将实验大鼠按体重编号,用随机数字表法分为5组,每组10只。采用中医证与西医病相结合的动物模型1-2：取大鼠新鲜结肠之黏膜层,制成黏膜匀浆,冷冻24h,融冻后以3000r/min速度离心30min,取上清
5、液提纯测定蛋白质含量,冰箱保存备用。使用时加入完全弗氏佐剂,模型组、痛泻二草方组、痛泻要方组、补脾益肠丸组首次足跖内注射抗原2mg,于第7、14、21天分别于足跖、腹腔内注射抗原4mg(末次注射不加佐剂)。同时将除空白组以外各组大鼠每日用胶布束绑后肢,限制活动及饮食方法,每天约8h,连续3周,造成肝郁脾虚证；并用醋酸诱导结肠溃疡,于第7、14、21天用20%乌拉坦4mL/kg麻醉大鼠后,用特制包有圆头的长注射针头插入大鼠肛门内约10cm处结肠内,注入5%醋酸1mL,复制肝郁脾虚证溃疡性结肠炎模型。空白组大鼠于第1
6、、7、14、21天给予足跖内、肛门内约10cm处结肠内注入等量生理盐水并作抓取刺激即可。痛泻二草方组(11g原药材/kg)、痛泻要方组(5g原药材/kg)分别按2mL/次灌胃；补脾益肠丸组(2g/kg),2mL/次灌胃；空白组与模型组每日给予2mL生理盐水灌胃。各组大鼠每天灌胃1次,连续4周。等效剂量以成人常规剂量按人与动物体型系数折算3。各组大鼠均以普通灭菌饲料喂养。2.2标本采集与处理各组动物结束灌胃、禁食不禁水24h后全部杀检。血清标本制备：股动脉采血5mL,37℃水中放置30min,以3000r/min离
7、心10min,分离血清,4℃冰箱保存,待测。结肠组织匀浆制备：采血后断头处死,低温条件下快速取结肠组织,以冰冷的生理盐水冲洗,滤纸吸干,称重后用眼科小剪刀尽快剪碎,置于匀浆器中用9倍生理盐水匀浆(匀浆器的末端置于放冰块的冷水中),后以3500r/min离心10min,取上清液置4℃冰箱保存,待测。血清IL-2测定采用放免法；肠黏膜NO、NOS测定采用比色法,参照试剂盒说明书进行操作。2.3统计学方法所有数据均输入计算机,采用SPSS11.0统计软件处理,实验数据以x±s表示,根据方差齐性采用单因素方差分析和q检验
8、。3结果(见表1、表2)表1各组大鼠血清IL-2含量的比较(略)注：与空白组比较,*P0.05,**P0.01；与模型组比较,△P0.05,△△P0.01(下同)。表2各组大鼠肠黏膜NO含量、NOS活力的比较(略)4讨论UC动物实验模型的建立有多种,研究已证实免疫法1导致的大鼠结肠损伤,其免疫功能异常、结肠病理学变化与人类自然发生的UC非常相似。乙酸模型2是应用化学刺激造
