大鼠溃疡性结肠炎模型的建立与观察.ppt

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1、大鼠溃疡性结肠炎模型的建立与观察黄永年张元德邢玉馥长春,白求恩医科大学第一临床医学院(黄永年、张元德);长春中医学院(邢玉馥)1995-08-08一、材料与方法1.实验动物:Wistar大鼠系,体重120~130g,雌雄各半。共用鼠86只,其中70只用作免疫实验;另16只不免疫,用作正常对照。2.细菌菌株:取一只健康大鼠的结肠内容物,划线于伊红—美蓝平板,37°C培养24小时,取典型菌落扩增,并作数值鉴定,确定为大肠杆菌后,冰箱保存备用。免疫前取菌种扩增,用福马林杀死细菌,生理盐水洗两次并调浓度为1.2x108/ml3.免疫过程:免疫动物分别于第1、1

2、0、17、24天共接受4次免疫。第一次于后足肠处注射细菌悬液0.2ml;第2、3次分别于腹部甸背部皮下多点注射0.4ml和0.6ml;第4次腹腔内注射1.2ml,其中半数动物在第2次免疫前给口服活菌1.5ml(浓度同前)。4.检查项目与方法:用常规方法每3天检查便潜血一次,用形态法测定淋巴细胞转化率;用比浊法测定循环免疫复合物;在不同时间处死动物,取各段结肠各0.5cm及肝、心、脾、肺、肾等脏器作病理切片,HE染色、光镜观察。一、材料与方法二、结果1.便潜血及主要症状:被免疫大鼠从第二周开始出现软便及便潜血阳性,但仅为部分大鼠且程度较轻;到第四周时所有

3、接受免疫的大鼠均表现为便潜血阳性。在继续饲养过程中,便潜血有加重倾向。在加服活菌的半数免疫动物,便潜血表现得更为严重,但与单纯免疫组比较无统计学差异(P>0.05)。免疫大鼠从第三周开始出现粘液便,并伴有食欲减退,消瘦,倦怠、毛松等症状。二、结果2.淋巴细胞转化率:第31天时取各组大鼠处死,测定淋巴细胞转化率。正常对照组为35.9士11.7;单纯免疫组为24.1士7.4;免疫同时加服活菌组为22.8士3.8;免疫组与正常对照组比较差异显著(P<0.05).加服活菌组与不加服活菌组比较,差异不显著(P>0.05)。二、结果3.循环免疫复合物:在第31天测

4、定淋巴细胞转化率的同时,测定循环免疫复合物。正常对照组为3.7士1.7;单纯免疫组为9.3士4.6;免疫同时加服活菌组为11.0士3.4。免疫组与正常对照组比较差异显著(P<0.05)。单纯免疫组与加服活菌组比较无明显差异(P>0.05)。二、结果4.病理改变:16只正常对照鼠结肠各层组织结构完整,除2份标本粘膜层可以看到极少数的嗜酸性粒细胞浸润外,其余标本无异常。而在免疫的70只鼠中,均可见粘膜及粘膜下层水肿,炎细胞浸润及血管炎改变。粘膜内可见多处隐窝脓疡及溃疡形成;溃疡有的深达粘膜下层或达浆膜,甚至形成粘膜下或浆膜下脓肿。无论是否加服活菌,病理改变

5、基本相同,并随时间的延长,溃疡的形成率在增加。比较各段结肠病变情况,可见病变在横结肠与降结肠更为多见,但与升结肠比较并无明显统计学差异。肝、心、脾、肺、肾等重要脏器未发现有意义的病理变化。三、讨论本文结果说明,随着免疫次数的增加,在大鼠的结肠壁上逐渐出现溃疡或弥漫性炎症;同时可以看到细胞免疫机能下降和循环免疫复合物增加。说明细胞免疫机能低下及循环免疫复合物的形成可能是溃疡性结肠炎发病的重要因素。此外加服活菌并不能影响结肠壁上溃疡形成的数量,说明单纯免疫即可达到造型的目的,使实验操作变得简单。本模型由于造型方法简便,抗原来源方便,而便于推广应用。本模型的

6、深入研究,可能为非特异性溃疡性结肠炎的病因学、发病机理及治疗药物的研究提供一个很好的模型。