nnos磷酸化在大鼠神经病理性疼痛发病机制中的作用研究

《nnos磷酸化在大鼠神经病理性疼痛发病机制中的作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2014级硕士学位论文nNOS磷酸化在大鼠神经病理性疼痛发病机制中的作用研究TheeffectofnNOSphosphorylationinspinalcordofneuropathicpaininrat课题来源：广东省自然科学基金项目9151008004000027学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员肖鹏冲崔建修教授麻醉学科研型硕士研究生研究生学院2014年5月23日广州硕士学位论文一警煳nNOS磷酸化在大鼠神经病理性疼痛发病机制中的作用研究硕士研究生姓名：肖鹏冲指导老师：崔

2、建修摘要背景：神经病理性疼痛最新定义是指躯体感觉神经系统的损伤或疾病而直接造成的疼痛而激发或引起的慢性疼痛疾病，在临床治疗过程是一个非常艰难的问题，对人们的生活问题有很大的影响。它是一种以异常痛敏、自发痛、痛觉过敏相关症状的慢性疼痛【l】。现阶段对其具体的发病情况是不了解的，这种疾病的发生时每年都在上涨，治疗非常的紧急但是对于目前治疗情况不是很好，在临床医学中的研究挑战性性是非常大的。大量实验证明在神经病理性疼痛的产生和维持时中枢敏化和外周中发挥了很重要的作用【2】。一氧化氮(NO)是神经元细胞内一种新型的神经递质，它由一氧化氮合

3、酶(sos)催化而成。在神经系统(nervoussystem)中的神经元型一氧化氮合酶(nNOS)是NO合成的关键酶。大量研究表明，nNOS调节就像神经病理性疼痛和炎性痛这类的多种生理和病理过程，nNOS发挥了重要作用在中枢神经系统和外周中的神经病理性疼痛里【3】。脊髓背角神经元中的神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的过度表达可由外周神经(penpheralnervous)损伤所致，在除此之外还会有痛觉失常和痛觉过敏等症状‘41。要减轻坐骨神经慢性压迫(chronicconstrictioninjury,co)或脊神经结扎(spin

4、alnerveligation，SNL)模型中的神经病理性相关的疼痛反应，可以在鞘内或全身注射选择性nNOS抑制剂或非特异性nNOS抑制剂；但是机械痛敏通过神经损伤所诱导的是不能通过nNOS敲除鼠显示出来的【5】。这些实验数据都说明神经病理性疼痛都是有nNOS参与的。摘要不同程度上nNOS的活性影响是可以通过对其不同位点进行磷酸化[6】。要降低nNOS活性，就先对神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的Ser847位点进行磷酸化，而磷酸化钙调蛋白依赖激酶II(CaMKII)可以对其磷酸化，去制止与Ca2+．CaM的结合。nNOS活性是可

5、以通过在Ser847位点磷酸化增加，通过降低去磷酸化。有大量实验数据表明，nNOS磷酸化是在激酶和磷酸酯酶像钙调蛋白、蛋白激酶A(PKA)、和蛋白激酶C(PKC)依赖激酶不同胞内外信号调节下的。有研究表明，nNOS在体内通过与其接头蛋白CAPON相互作用，从而发挥调控作用【_71。但nNOS其接头蛋白CAPON相互作用强度降低，不知是否是由于nNOS被CaMKII磷酸导致的，从而导致疼痛阈值增加也尚不得而知。目的：通过建立SNL神经病理性疼痛模型，采用行为学，免疫蛋白印迹方法，免疫共沉淀与激光共聚焦实验，观察SNL术后脊髓组织中C

6、aMKII磷酸化水平(活性)的变化，并鞘内注射pCaMKII特异性抑制剂KN93，观察其镇痛疗效和对脊髓背角和DGR中nNOS的表达量的影响，试图阐明是否是CaMKII通过磷酸化nNOS，降低nNOS与其接头蛋白CAPON在体内的相互作用，从而提高nNOS磷酸化在神经病理性疼痛中的镇痛作用。第一节神经病理性疼痛大鼠模型的建立与疼痛阈值的测定及pCaMKII与nNOS表达水平检测材料与方法：实验的对象是质量150"--200g雄性SD大鼠。大鼠分笼饲养，大鼠饮食需要自由，间隔一天日以后换掉旧垫料。大鼠饲养的室内温度要一直在20--一

7、25℃，湿度50％～80％，循环在12～12h白天．黑夜进行照明。要使大鼠的痛苦尽量减轻在每一步实验时，使用原则操作必须按照有关实验动物所需要的进行。总共分组为2组是按照随机化原则所分，第1组模型组，选用大鼠15只，制作L5脊神经结扎(SNL)模型；第2组为假手术(Sham)组，选用大鼠15只，仅显露脊神经而不结扎。通过VonFreyfilament测定大鼠神经结扎侧(左侧)后足缩足反射阈值(MWT)。II硕士学位论文结果：1、与假手术组相比SNL模型组大鼠术后3天、7天和14天痛阈值均明显降低(P<0．05)，并且低于术前基础值

8、(P<0．05)。2、术后3天、7天和14天，腰段脊髓组织中总CaMKII水平无明显变化，但是pCaMKII水平与假手术组相比则明显增加；腰段脊髓组织中总nNOS水平无明显变化，但是pnNOS水平与假手术组相比则明显降低。结论：l、SNL术后，明显