microrna-451对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

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1、microRNA．451对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响专业年级：姓名：导师：完成日期：学校代码：10023学号：200401078北京协和医学院临床医学专业2004级付极赵玉沛(教授)胡亚(副教授)北京协和医学院临床学院基本外科2012年6月ⅢIllUlIIIIIIIIIIIIIIlllUlIIIIIY2124000目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8

2、第一部分microRNA．451在胰腺癌细胞株SWl990亲本株及吉西他滨耐药株中表达差异的验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19第二部分microRNA．451对胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯．21摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21材料和方法⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：；：；第三部分microRNA．45l对吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的影响及机制⋯⋯⋯⋯．35摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37

4、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66缩略词表3中文摘要背景胰腺癌是一种预后极差的消化系统恶性肿瘤，大部分患者就诊时己属于晚期，仅15％患者能行手术治疗，但5年生存率低于10％。最近几年，虽进行了大量胰腺癌放疗和化疗的研究

5、，但是总体治疗效果不理想，其一线治疗药吉西他滨总体有效率约20％，目前面临着耐药率高等问题。因此，胰腺癌耐药仍是目前国内外研究的难点和热点。microRNA是一类长度为21．25nt的单链非编码RNA。microRNA以干扰mRNA翻译的方式调控蛋白表达。近年来一系列研究发现其在肿瘤的发生、发展过程中起到广泛的作用。在乳腺癌，非小细胞肺癌，结直肠癌中，microRNA．45l都通过不同方式调节肿瘤对于不同药物的化疗敏感性。本实验室前期研究发现microRNA．451的水平，在胰腺癌耐药株和亲本株中有差异。本实验在前期研究的基础之上，进一步研究microRNA

6、．451在胰腺癌细胞株中对化疗敏感性的影响和机制。研究目的l、证实microRNA．451在胰腺癌亲本细胞株和耐药细胞株中的表达差异；2、通过外源干预microRNA．451在胰腺癌细胞株中的表达，检测胰腺癌细胞对吉西他滨化疗敏感性的改变；3、探索microRNA．451调控胰腺癌细胞株对吉西他滨化疗敏感性的机制。方法l、通过实时荧光定量PCR检测SWl990亲本株和吉西他滨耐药株间microRNA．451的表达差异；2、应用Lipofectamine2000瞬时转染胰腺癌细胞株SWl990和MIA-PaCa2，CCK-8法检测细胞在不同浓度吉西他滨处理下的

7、抑制率，对比转染组和对照组的化疗敏感性；3、应用AnnexinV／PI双染法、Caspase．3活性检测和WesternBlot检测转染microRNA一451后，吉西他滨诱导胰腺癌细胞的凋亡水平及机制。结果l、microRNA．451在SWl990吉西他滨耐药株中的平均表达水平为亲本株水平的O．223倍fP=0．006)；2、在SWl990和MIA．PaCa2细胞系中提高microRNA一451水平可以提高胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性(P<0．05)，降低microRNA．451水平可以降低胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性(P

8、nnexinV／PI双染发现，在SWl990和MIA