登革2型病毒ngc株对小鼠髓源性dctlr4、tlr7表达影响的研究

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1、《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R392.12学号：090028贵阳医学院2012届硕士学位论文登革2型病毒NGC株对小鼠髓源性DCTLR4、TLR7表达影响的研究研究生：张海燕导师：左丽教授年级：2009级专业：免疫学973计划前期研究专项课题（资助号：2008CB517408）国家自然科学基金（31060129）2012年5月目录摘要………………………………………1前言………………………………………3材料与方法………………………………6结果………………………………………21讨论………………………………………33参考文献…………………………………37英文摘要………………

2、…………………42致谢………………………………………44缩略词表……………………………………45论文原创性声明…………………………46附：综述………………………………47贵阳医学院2012届硕士研究生论文登革2型病毒NGC株对小鼠髓源性DCTLR4、TLR7表达影响的研究专业：免疫学研究生：张海燕导师：左丽教授摘要目的：通过登革2型病毒（DEN2）NGC株感染小鼠髓源性树突状细胞（DC），观察DEN2感染DC后CD11c、CD86、I-A/I-E、TLR4和TLR7的表达，为研究DEN2感染的发病机制提供科学依据。方法：BALB/c乳鼠脑内接种及C6/36细胞增殖病毒，RT-PCR鉴定病毒

3、核酸,50%组织细胞感染量（TCID50）测定病毒毒力；rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导鼠源性DC，鉴定细胞及其纯度；直接免疫荧光法观察DEN2感染DC;流式细胞术检测DC细胞被DEN2感染后膜表面分子CD11c、CD86、MHC-II类分子表达的动态变化；实时荧光定量PCR动态检测DEN2NGC株感染DC细胞后DEN2mRNA、TLR4和TLR7mRNA水平表达的变化。结果：5.81、DEN2对C6/36细胞的TCID50为10。2、用IL-4和GM-CSF诱导C57BL/6小鼠骨髓来源细胞，5d后通过流式细胞术鉴定其DC的纯度达到70%。3、DEN2能够感染小鼠骨髓来源DC。44

4、、与阴性对照组相比，接种病毒组（1×10TCID50）的DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差异无统计学意义（P>0.05）。与阴性对照组相比，接种病毒5组（1×10TCID50）的DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差异均有统计学意义（P＜0.05），但各组其百分率的变化并未随着时间的延长，呈现出明显的上升或下降的趋势；随着病毒剂量的增加，DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率呈现出上升的趋势。5、与阴性对照组比较，Real-timePCR证明各组病毒mRNA水平随着病毒剂量的增大而逐渐升高。6、与阴性对照组比较，Real-timePCR检测各组被DEN

5、2感染的DCTLR4、TLR7mRNA随着病毒剂量的增加，呈现下调的趋势。结论：1贵阳医学院2012届硕士研究生论文1、DEN2可促进DC的成熟。2、DEN2感染DC后，TLR4、TLR7mRNA水平随病毒mRNA水平的增加而降低，提示TLR4、TLR7与病毒感染密切相关，在DEN致病中发挥了一定的作用和功能。关键词：C57BL/6小鼠；登革2型病毒;树突状细胞；TLR4;TLR72贵阳医学院2012届硕士研究生论文1.前言登革病毒(Denguevirus,DEN)属于黄病毒科病毒属成员,包括DEN1-4四个[1-3]血清型。DEN可以通过蚊虫的叮咬传播给人，人是主要的自然宿主，埃及伊蚊和

6、白纹伊蚊是主要传播媒介。WHO资料显示，近年来DEN感染引起人类疾病的发病[4、5]率在全球呈明显上升趋势。DEN感染人体后可以引起登革热(Denguefever,DF)、登革出血热(Denguehemorrhagicfever,DHF)和登革休克综合症(Dengue[6、7]shocksyndrome,DSS),DHF/DSS常可导致死亡。DEN为球形颗粒，直径45-55nm,含有脂质双层膜包裹的核衣壳。核心为有感染性的单股正链RNA，全长约11kb，只含有一个开放的读码框架（ORF)，编码约3400个氨基酸。DEN感染所致疾病，尤其DHF至今一直是国内外研究的重要课题[8-10]。目前

7、认为登革病毒的致病机制主要与机体的免疫功能和病毒毒力有关，由此提出的发病机制包括抗体依赖的感染增强作用（Antibodydependent[10、11]enhancement,ADE），细胞免疫的作用、细胞因子的作用等，但至今尚未完全阐明。树突状细胞(Dendriticcell，DC)是目前所知的功能最强大的抗原呈递细胞(Antigenpresentingcell，APCs)，是固有免疫和适应性免疫的桥梁和纽带,对其免疫