sox2、brdu及nestin阳性细胞在穹窿下器内分布情况及形态学观察

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1、河北医科大学硕士学位论文Sox2、BrdU及Nestin阳性细胞在穹窿下器内分布情况及形态学观察姓名：徐彦芳申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：马常升；曹翠丽201203中文摘要Sox2、BrdU及Nestin阳性细胞在穹窿下器内分布情况及形态学观察摘要目的：观察穹窿下器中神经干细胞的分布及形态。方法：选择健康雄性SD大鼠22只，体重150．1809，随机分成两组：①对照组(n=12)：不作处理；②用药组(n=10)。1、制备BrdU标记实验动物模型：按照体重50mg／Kg对实验动物腹腔注

2、射BrdU生理盐水注射液。分别于14：00和16：00给药，连续给药三天，制备BrdU模型。2、免疫组织化学染色：正常动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，浸蜡包埋，选取含穹窿下器部分，石蜡切片，厚度为5um，分别经Nestin和Sox2免疫组织化学染色，封片后OlympusBX．UCB显微照相系统观察照像。3、Nestin、Sox2免疫荧光组织化学双标染色步骤：正常动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后选含穹窿下器部分，冰冻切片，厚度为10um，经Nestin、SOX2免疫荧光组织化学双标染色，甘油

3、封固后OlympusBX．UCB显微照相系统观察照像。4、BrdU标记实验动物免疫组织化学染色：BrdU模型动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，浸蜡包埋，选取含穹窿下器部分，石蜡切片，厚度为5urn，经BrdU免疫组织化学染色，封片后OlympusBX．UCB显微照相系统观察照像。。5、BrdU模型动物经BrdU，Sox2免疫荧光组织化学双标染色：模型动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后选含穹窿下器部分，冰冻切片，厚度为10urn，经BrdU、Sox2免疫荧光组织化学双标染色，甘油封固后Olymp

4、usBX．UCB显微照相系统观察照像。6、统计学处理：阳性细胞采用专业图像分析软件Image．ProPlus6．0测定平均光密度值。用spssl3．0软件进行分析。采用SNK．q检验，以P<0．05为有显著性差异。结果：中文摘要l、甲苯胺蓝染色结果观察光镜下，经甲苯胺蓝染色后，可以看到SFO内有丰富的毛细血管分布，两外侧区有一些较大的血管，血管周围的组织排列较紧密，核心区域是微血管。室管膜细胞呈单层排列，细胞形态呈梭形，细胞表面光滑，细胞核大小不等，呈椭圆形或圆形。SFO内的细胞分布并不均匀，在大血管周围，

5、SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层，以上部位的细胞为大细胞，胞体较丰满，染色比较均匀，但突起并不明显，细胞核呈椭圆形或圆形。其余部位的细胞一般较小，主要分布于SFO中心区的小血管四周。在SFO中心区分散了一些体积较大的细胞。血管间隙内可见胞浆内含有微小气泡的神经内分泌样细胞，此种细胞胞体较丰满，突起较少，且长度较短。2、免疫组织化学结果观察2．1SOX2：在SFO的冠状面上可以看到SOX2免疫阳性细胞排列紧密，胞核为中等大小，呈圆形或椭圆形，中间部较两侧边缘部SOX2阳性细胞多，SFO内血管周围的SOX2

6、免疫阳性细胞较少，室管膜处可见单层排列的SOX2免疫阳性细胞，而与SFO相连的海马腹侧联合内，只有少量的阳性细胞，侧脑室室管膜的阳性细胞呈单层紧密排列。脉络丛未见阳性表达。SFO两侧部SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0．37834-0．025l，中间部SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0．51774-0．0352。海马腹侧联合SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为O．2185士0．0473。SFO两侧部与中间部比较结果显示有显著性差异(尸<0．05)，SFO与海马腹侧联合比较结果显示有显著性差异(P

7、．05)。2．2Nestin：SFO内Nestin阳性细胞呈不均匀分布，主要分布于大血管周围，SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层，血管周围可见围绕血管的阳性表达。侧脑室的室管膜内可见单层紧密排列的阳性细胞。脉络丛内也可见阳性表达。SFO相连的海马腹侧联合内，未见阳性细胞。SFO两侧部比中间部阳性细胞多。SFO两侧部Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0．3745士0．0553，中间部Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0．21454-0．0241。SFO两侧部与中间部比较结果显示有显著性差异(P<

8、0．05)。2．3BrdU：冠状切面上SFO内可见散在的BrdU免疫阳性细胞，由于数量较少，所有分布位置不恒定。中文摘要3、免疫荧光组织化学结果的观察3．1BrdU、SOX2免疫荧光组织化学双标结果观察：SFO内可见SOX2免疫荧光阳性细胞排列紧密，胞核中等大小，呈圆形或椭圆形，SOX2阳性细胞分布广泛，遍布整个SFO，但中间部较两侧边缘部SOX2免疫荧光阳性细胞多，而SFO内血管周围的SOX2免疫阳性细胞较少，