mir-34a在癫痫持续状态后大鼠海马神经元凋亡发生中的作用

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1、八年制博士学位论文密级miR-34a在癫痫持续状态后大鼠海马神经元凋亡发生中的作用TheroleofmiR-34ainrathippocampalneuronapoptosisfollowingstatusepilepticus作者姓名：解媛媛学科专业：神经病学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：肖波教授论文答辩日期卫f羔：堕：堡答辩委员会主中南大学2012年04月汤得形r^原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另clDN以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包

2、含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：导师签名蛀日期：堂!三年』二月兰日八年制博士学位论文中文摘要摘要目的观察大鼠癫

3、痫持续状态(statusepilepticus，SE)后海马区脑组织miR．34a的表达分布规律；通过干预miR-34a表达水平，探讨其在癫痫后海马神经元凋亡中的作用。方法1．建立模型：采用6，．-．8周龄健康雄性SD大鼠，随机分为空白对照组(Normal，N组)，癫痫组(Epilepsy，Zp组)，干预组(Antagomir，A组)和干预对照组(Antagomir-control，C组)。对EP组、A组、C组建立氯化锂一匹罗卡品致痫大鼠SE模型。在SE诱导成功后4-6小时分别对A组和C组侧脑室立体定向给予Antagomir和Antagomir-control干

4、预miR-34a表达水平，各组均以在1天(24小时，急性期)、7天(静止期)作为研究时间点。2．对大鼠行脑电图检查，记录生理状态、致痫期Ⅳ级以上发作状态、造模成功后发作间期状态、自发发作状态的脑电变化，确认癫痫模型的建立。3．实时定量．PCR检测各组miR-34a表达水平，检测干预前后miR一34a表达量的变化，以验证药物干预miR一34a的效果。4．采用WesternBlot和免疫组化技术检测caspase．3蛋白在大鼠海马组织中的分部及其表达量的变化。八年制博士学位论文中文摘要5．TUNEL(Terminaldeoxynucleotidyltransfera

5、se—mediateddUTPnick-end—labeling)法检测大鼠SE后海马区脑组织神经元细胞凋亡情况。6．Nissl染色研究大鼠SE后海马区脑组织神经元细胞缺失及存留情况。勿士甲耋口木1．依据动物行为学表现及脑电图结果，最终造模组(Ep组、A组、C组)大鼠成模率为89．17％。成模及干预后，大鼠因自身恢复、麻醉意外、手术创伤等因素，部分发生死亡，最终可用实验组动物的成活率为69．17％。2．实时定量PCR检测显示，在急性期和静止期，miR-34a的表达在Ep组较N组均显著增高，药物干预后A组较C组均显著降低，有显著性差异，干预有效。3．Western

6、Blot检测显示，在急性期和静止期，caspase一3蛋白的表达在Ep组较N组均显著增高，药物干预后A组较C组均显著降低，有显著性差异，与实时定量PCR结果趋势相一致。4．免疫组化检测显示，在急性期和静止期，Ep组与药物干预对照C组中caspase一3蛋白在海马(CAl、CA3区)神经元胞浆均高表达，而N组和药物干预A组均仅有较低密度的表达，与WesternBlot结果相一致。5．TUNEL检测显示，在急性期和静止期，Ep组海马(CAl、CA3TT八年制博士学位论文中文摘要区)神经元细胞凋亡均明显多于N组；药物干预后A组海马(CAl、CA3区)神经元细胞凋亡均明

7、显低于C组，与实时定量PCR、WestemBlot、免疫组化结果相一致。6．Nissl染色显示，在急性期和静止期，Ep组海马(CAl、CA3区)神经元细胞损失均明显多于N组，存留的神经元细胞均明显少于N组；药物干预后A组海马(CAl、CA3区)神经元细胞损失均明显少于C组，存留的神经元细胞均明显多于N组，与实时定量PCR、WesternBlot、免疫组化、TUNEL结果相适应。结论大鼠癫痫持续状态后的急性期和静止期，海马(CAl、CA3区)神经元中miRNA．34a可通过上调caspase．3蛋白的表达，激活下游凋亡通路，造成海马区神经元细胞凋亡。关键词癫痫持续

8、状态(SE)，miR-3