cdx2、pten、p53与survivin蛋白在单纯肠上皮化生、不典型肠上皮化生的表达及与胃癌的关系

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1、山东大学硕士学位论文监测带来了困难，如何区分并早期发现这些高危人群，对胃癌的早期诊断具有重要意义。所以IM分型与胃癌发生的关系是目前噬待解决的问题。本研究根据IM上皮细胞形态及上皮结构将IM分为以下两型：单纯肠上皮化生(simpleintestinalmetaplasia，SIM)和不典型肠上皮化生(atypicalintestinalmetaplasia，AIM)H1，应用免疫组织化学方法检NIJSIM、AIM矛I胃癌中CDX2、PTEN、p53和Survivin蛋白的表达，进一步探讨SIM、AIM与胃癌的关系。CDX2是肠道特异性转录因子，对肠上皮细胞的

2、分化、增殖、凋亡和肠道特定基因的转录起调控作用。PTEN基因为具有磷酸酶活性的抑癌基因，可以通过刺激CDX2启动子转录活性增强CDX2的表达。p53基因是基因研究中最广泛深入的肿瘤基因，人类肿瘤约50％以上与p53基因变化有关。Survivin是凋亡蛋白抑制因子家族成员，在人类许多肿瘤组织中表达。本研究应用免疫组织化学方法检i见!JCDX2、PTEN、p53和Survivin蛋白在SIM、AIM和胃癌组织中的表达，分析其表达与SIM、AIM及胃癌的相关性，探讨SIM、AIM与胃癌的关系。山东大学硕士学位论文资料与方法一、临床资料i、标本收集山东大学齐鲁医院病

3、理科2005年1月～2006年12月IM病例226例，观察其病理组织形态特点(男156例，占IM病例的69．0％，女70例，占IM病例的31．O％，年龄31，--78岁，SIM148例，占IM病例的65．5％，AIM78例，占IM病例的34．5％)，选取其中蜡块保存较好的胃镜活检及胃癌手术切除标本行免疫组织化学检测，其中SIM病例23例，男16例，占SIM的69．6％，女7例，占SIM的30．4％，年龄32一--73岁，平均年龄49．5岁。AIM33例，男22例，占AIM的66．7％，女11例，占AIM的33．3％，年龄34，--70岁，平均年龄53．2岁。

4、胃癌44例(其中肠型胃癌26例)，男30例，占胃癌的68．2％，女14例，占胃癌的31．8％，年龄32一--77岁，平均年龄55．5岁。所有标本4um连续切片，分别作HE染色和免疫组织化学染色。2、抗体鼠单克隆抗体CDX2、PTEN、p53和Survivin(即用型)及PV9000检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。3、其他试剂DAB显色试剂盒，PBS缓冲液，枸橼酸盐修复液等均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。二、实验方法及过程1、实验流程查阅病例档案，统计并收集病例，选取病例O84pm连续切片日HE染色，观察组织形态特点O免疫组织化学染色O观察分

5、析实验结果山东大学硕士学位论文O采用SPSS12．0统计软件进行统计学处理2、石蜡切片存档蜡块连续切片，切片厚约4um，置60。C烤箱中2h。3、常规HE染色，观察胃粘膜IM的组织病理形态。具体步骤如下：(1)．石蜡切片(60℃)放置二甲苯溶液中5min，提插两次；(2)．室温下经梯度乙醇从高到低逐级入水，流水冲洗3～5min；(3)．苏木素溶液染色，流水冲洗3min；(4)．1％盐酸酒精溶液Imin，流水冲洗3min；(5)．伊红溶液3～5min，流水冲洗3min；(6)．O．1％氨水溶液浸泡imin，流水冲洗3～5min．(7)．从低到高的梯度乙醇溶液脱

6、水；(8)．二甲苯透明；(9)．中性树脂胶封片。4、免疫组织化学染色用EnVision法聆1，观察CDX2、PTEN、p53和Survivin蛋白在SIM、AIM与胃癌中的表达情况。具体步骤如下：(1)．切片脱蜡：石蜡切片经二甲苯脱蜡梯度乙醇水化，蒸馏水冲洗二次。(2)．抗原修复：配制枸橼酸盐缓冲工作液，将切片放入微波炉置高档微沸腾5分钟后，调至中档10分钟，加热过程始终保持切片侵没于抗原修复液中。室温下自然冷却至室温后，将切片从修复液中取出，PBS冲洗3次，每次3分钟，甩去多余水分。(3)．消除内源性过氧化物酶活性：每张切片加50u13％H：0。溶液(试剂

7、A)，室温下孵育10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。(4)．PBS冲洗3次，每次3分钟，甩去多余水分。(5)．一抗作用：每张切片滴加50ul一抗，置于湿盒中。4度冰箱孵育过夜。(6)．切片置于室温下自然复温。(7)．PBS冲洗3次，每次3分钟，甩去多余水分。(8)．滴加试剂B(聚合酶辅助剂)，37度孵育20分钟。(9)．PBS冲洗3次，每次3分钟，甩去多余水分。9山东大学硕士学位论文(10)．滴加试Nc(辣根酶标记羊抗兔／小鼠IgG多聚合体)，室温37度孵育30分钟。(11)．PBS冲洗3次，每次3分钟，甩去多余水分。(12)．每张切片滴加新鲜配制的显色)

8、菁UDAB溶液，显色约30秒～lO分钟，显微镜下观察