硼替佐米,阿糖胞苷序贯处理对k562细胞内ship基因,mtor基因,nf-κb基因表达的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文硼替佐米，阿糖胞苷序贯处理对K562细胞内SHIP基因，mTOR基因，NF--κB基因表达的影响姓名：赵光伟申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：罗建民201203中文摘要硼替佐米，阿糖胞苷序贯处理对K562细胞内SHIP基因，mTOR基因，NF．KB基因表达的影响摘要目的：慢性粒细胞白血病(CML)是由于多能造血干细胞突变引起的克隆性恶性增殖性疾病。在中国，CML的发病率约为0．36／10万人口，仅次于急性粒细胞白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)。随着分子

2、生物技术的发展，慢性粒细胞白血病的机理逐渐被了解。其中约95％的CIVIL患者有t(9，22)(q34；q11)染色体核型，既Ph染色体，形成BCR／ABL融合基因，编码P210蛋白，能增强酪氨酸激酶活性，从而抑制细胞凋亡。研究表明，P13K信号通路作为BCR／ABL下游很重要的信号通路，发挥重要作用。SHIP(肌醇5’．磷酸酶SI-12domaincontaininginositol57．phosphatase，SHIP，属于PIPase家族)基因是继PTEN基因后发现的，仅在造血细胞表达的，

3、一种新的肌醇磷酸酶，通过降解PIP3，负调控P13K／Akt信号通路。本研究组前期研究显示：急性白血病患者存在SHIP基因突变，SHIP基因低表达与人白血病细胞恶性增殖有关，SHIP基因可以诱导K562细胞凋亡；BCR／ABL可以被甲磺酸伊马替尼封闭，从而上调SHIP蛋白表达水平。尽管伊马替尼有着积极的作用，但使用此药的近20％的患者没有完全的细胞遗传学反应，而部分患者可能存在难以忍受的副作用或耐药性。所以，寻找一种新型的治疗慢粒的药物是必要的。硼替佐米是目前临床可以使用的蛋白酶体抑制剂，主要应

4、用于治疗复发、难治的多发性骨髓瘤。硼替佐米与其他抗肿瘤药物联合应用，在多种恶性肿瘤显示了抑制作用，应用前景广阔。目前，硼替佐米的作用机制尚未完全清楚。本研究采用硼替佐米与阿糖胞苷，单药及不同联合方式作用于K562细胞，观察抑制率，凋亡率，检测SHIP基因，mTOR基因及NF．KB基因的变化，探讨作用机制，为CML的治疗寻找新的方法。方法：研究对象为人慢性粒细胞白血病细胞株K562。将K562细胞株完全随机分成6个处理组，分别为1对照组；2硼替佐米处理组，处理48小时；3阿糖胞苷处理组，处理48小

5、时。4硼替佐米处理6小时后序贯给予阿糖胞苷，共48小时；5阿糖胞苷处理6小时后给予硼替佐米，共48中文摘要小时6同时给予硼替佐米和阿糖胞苷，共48小时。①应用MTT法检查各组细胞增殖抑制率，②应用流式细胞术检测凋亡率，③应用聚合酶链式反应(PCR)检测相关基因表达量的变化．④用SPSS13．o进行统计学处理，应用单因素方差分析，多处理组均数间多重比较，SNK法，检验水准0．05．结果：1MTT检测抑制率结果显示：单药与联合用药都可以抑制细胞增殖率。在一定范围内与药物浓度与时间存在正相关关系。联合

6、作用强于单独作用，其中先用阿糖胞苷处理再给予硼替佐米(Ara．C—BTZ)处理做抑制作用最强，为86．46％，其次为同时处理组(Ara-C+BTZ)和先硼替佐米后阿糖胞苷(BTZ啼Ara-C)，均为62．2％，单药组约为46％，P<0．05。2流式细胞仪检测凋亡结果显示：单药与联合用药都可以使凋亡率增加。联合用药作用强于单药，其中凋亡率(Ara．C—BTZ)组为(84．26+．2．94)％：(Ara．C+BTZ)组(69．57士3．64)％；(BTZ—Ara．C)组(62．21土．1．35)％，

7、P<0．05。单药组分别为(24．01士1．84)％和(20．93士2．93)％，P>0．05。3PCR检测SHIP，mTOR，NF．rd3基因结果显示：硼替佐米与阿糖胞苷均可以使SHIP基因表达量上调，联合作用强于单药作用(BTZ：1．1209士0．0776；Ara．C：0．9709士0．2747，单药组无统计学差异；Ara-C+BTZ：2．5348士0．13787；BTZ—Ara．C；2．2189士．0．3229；Ara—C—BTZ：2．4019士．0．3067，联合组间无统计学差异。对照组

8、0．3141士．0．0822。三组间有统计学差异)。mTOR基因表达量下降(对照组2．1053士．0．0967，A船一C：1．3253士0．0448；BTZ：1．1863士0．0247；Ara-C+BTZ：0．8623士0．0725：BTZ—Ara-C：0．7353士．O．0673；Ara-C—BTZ：0．8703士．0．0556联合组间无统计学差异，联合组与单药组，对照组之间均有统计学差异)。NF．1出基因表达下调，联合作用优于单药作用，以阿糖胞苷预处理组下调最显著。(依次为Ara．C：2．1