树突状细胞在多柔比星诱导的大鼠肾纤维化模型中的作用

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2011Jan；46(1)·15·树突状细胞在多柔比星诱导的大鼠肾纤维化模型中的作用汪燕，王显，沈雯雯，周琪，张伯科摘要目的以多柔比星诱导肾纤维化大鼠为对象，探讨树研究肾纤维化早期阶段的发生机制及主导因突状细胞(DC)在慢性肾纤维化启动过程中的作用。方法素，对探讨防治肾纤维化的有效手段具有重要意义。52只大鼠随机分为：对照组(n=20)、模型组(n=32)。于第尽管人们早已认识到树突状细胞(dendriticcell，1、2周第1天给予多柔比星(4m

2、g／kg)尾静脉注射建立肾纤DC)在诱导和调节适应性免疫过程中起关键作用，维化模型，对照组给予等量生理盐水，首次给药后第4、7、但因其极易损坏而致探测和分离肾组织内DC在技10、13周末收集血、尿标本，测定血甘油三脂、总胆固醇和白术上难度很大，直到1994年才找到肾组织内存在蛋白及24h尿蛋白排泄率；应用Masson染色观察肾脏组织Dc的确凿证据J，而目前仍缺乏DC在慢性肾纤维形态学变化，并计算肾小球硬化指数(GSI)及肾小管间质损伤指数(TII)；应用免疫组化观察DC生物学标志(0X62)的化过程中作用的研究资料。本研究利用大鼠

3、多柔比变化；应用Westernblot技术检测肾组织肝细胞生长因子星蛋白尿慢性肾损伤模型，观察肾组织内DC数量(HGF)的表达。结果与对照组相比，第7周末模型组血甘变化及其与抗／促纤维化因子肝细胞生长因子／转化油三酯、总胆固醇升高(P<0．01)，白蛋白明显降低(P<生长因子13(HGF／TGF．B)和组织损害问的关系，旨0．01)，24h尿蛋白排泄率明显增加(P<0．01)，且随实验时在探讨DC在蛋白尿慢性肾纤维化发生发展过程中间呈逐渐上升趋势。光镜下观察，肾小球系膜基质明显增的作用。多，肾小管多灶性萎缩和扩张，管腔内可见蛋白管

4、型，并随时间延长逐渐加重。GSI及TII逐渐升高(P<0．05)。于第71材料与方法周肾间质0X62阳性细胞数量最多，后逐渐减少(P<0．叭)。肾脏HGF表达4周时较对照组增加(P<0．01)，7周时开始1．1实验动物8周龄健康雄性SD大鼠52只，体降低，并随病程呈进一步降低。结论DC可能参与慢性肾重(200±20)g(南京医科大学实验动物中心提供)，脏纤维化的启动过程，主要通过对免疫活性细胞和肾组织固清洁级。分笼饲养，置于室温(22±2)oC，相对湿度有细胞及组织结构成分的影响发挥作用。(55-4-5)％，自然昼夜节律，自由摄食

5、饮水。适应饲主题词树突细胞；多柔比星；蛋白尿养1周后，定性测尿蛋白阴性后用于实验。自由词肾纤维化；0X62中图分类号R692；R446．121；R977．61．2药物和试剂盐酸多柔比星购自浙江海正公文献标识码A文章编号1000—1492(2011)01—0015—05司，临用前溶解在生理盐水中，pH7．0；尿蛋白测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒购自南京建成2010—11—17接收生物工程研究所；兔抗大鼠HGF(c-Met)抗体、0X62基金项目：安徽省自然科学基金(编号：070413074)作者单位：安徽医科大学第一附属医院肾

6、脏内科，合肥230022单克隆抗体购自美国SantaCruz；SP试剂盒(SP一作者简介：汪燕，女，硕士研究生；9000)、多聚赖氨酸(Poly．L—LysineSolution，ZLI-张伯科，男，教授，硕士生导师，责任作者，E—mail：zbklfdf@yahoo．com．cn9005)、DAB试剂盒(ZLI-9032)、AEC试剂盒(ZLI—wasdetectedinthecellswithtransientandstabletransfectionbytime—resolvedfluoroimmunoassays(TRFI

7、A)．HBVDNAreplicationwasexaminedbyfluorescencequantitativePCR．ResultsThreeamiRNAcouldsignificantlyre—ducetheLamRNAandproteinexpression，thegreatestreductionwasamiRNA—La一610transfectedgroup，theex—pressionofLamRNAandproteinlevelsweredown-regulatedby57．3％and49．8％at72h(P<0．

8、O1)．Inthevi—ruSlevel，threeamiRNA—LaplasmidscouldinhibitthesecretionofHBsAgandHBeAg，thegreatestreductiongroupwasamiRNA—La-610