hsa-mir-1246在胃腺癌上皮—间充质转化发生中的作用

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1、万方数据中图分类号UDC61O硕士学位论文学校代码10533密级公珏hsa．miR．1246在胃腺癌上皮一间充质转化发生中的作用Theroleofhsa--miR--1246inEMTofgastricadenocarcinoma作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：肖恒基础医学病理学与病理生理学基础医学院王宽松副教授论文答辩日期塑!生：￡：丝答辩委员会主中南大学二。一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文

2、中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：__智恒学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密

3、后适应本声明。作者签名：嘀值日期：型生年』月4日导师答名王彩导师签名工彬日期：兰丝年』月4日万方数据hsa．miR一1246在胃腺癌上皮一间充质转化发生中的作用摘要背景与目的：胃癌(Gastriccancer，GC)是临床上最常见的恶性肿瘤之一，在肿瘤致死病因中高居第二位。其中，胃腺癌(Gastricadenocarcinoma)是胃癌的主要组织学类型，其发病率占胃恶性肿瘤发病率的95％。肿瘤的侵袭转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。因此，研究肿瘤的侵袭转移机制对降低癌症恶性行为及提高患者生存质量有重大意义。上皮一间充质转化(Epithelial．me

4、senchymaltransition，EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程，在肿瘤的演进过程中发挥重要作用。大量研究表明miRNA参与了多种病理生理过程，它在EMT过程中的作用不可小觑。文献表明：血清‘miR-1246与食管鳞状细胞癌的TNM分期有关；miR．1246等六个血清miRNAs的表达水平能够预测早期宫颈鳞状细胞癌的淋巴结转移。p53及其类似物p63和p73能靶向作用于miR-1246，后者通过抑制DYRKlA(dual—specificitytyrosine一(Y)一phosphorylationreg

5、ulatedkinase1A)的表达，进而活化NFAT(nuclearfactorofactivatedTcells)，从而引起细胞凋亡，发挥抗癌功能。本课题组在前期探讨EGFL7与胃腺癌侵袭转移关系的过程中，发现在不同的处理组hsa-miR-1246(以下简称miR-1246)存在显著的差异表达，因此我们推测miR-1246可能参与了对胃癌侵袭转移的调节，其机制有待进一步的深入探讨。本研究拟以胃腺癌细胞株BGC823和胃腺癌、胃腺癌癌旁黏膜及胃黏膜良性病变(胃炎及胃溃疡)组织石蜡块为研究对象，初步探讨miR．1246对胃癌发生和EMT的影响。方法：

6、(1)采用探针法荧光定量PCR在组织水平检测高、中、低分化胃腺癌组织石蜡标本miR-1246的相对表达水平。每组样本随机抽取相应癌旁胃黏膜组织石蜡标本进行其miR-1246相对表达水平的检测。选取12例胃良性病变(胃炎或胃溃疡)的胃黏膜组织石蜡标本，进行其miR-1246相对表达水平的检测。统计分析miR-1246的相对表达水平与胃黏膜腺体分化水平及临床参数之间的关系。(2)采用免疫组织化学技术和免疫组化评分标准分析胃腺癌石蜡标本中E．cadherin和Vimemin的蛋白表达水平，分析其与万方数据miR．1246及各项临床数据的关系。(3)采用慢病

7、毒作为载体，对BGC823细胞分别稳定转染miR一1246前体及阴性对照，在荧光显微镜下确定转染效率，经嘌呤霉素筛选得到两个稳定细胞株。用探针法荧光定量PCR检测miR-1246在BGC823miR一1246过表达组、BGC823mimicsNC组和BGC823本底组的相对表达水平，确认转染成功，再用Westernblotting检测E—cadherin和vimentin在三组中的表达水平。拍照并观察三组细胞的形态学变化。结果：(1)miR-1246在胃腺癌、胃腺癌癌旁和胃良性病变黏膜组织石蜡标本中的相对表达水平有升高的趋势，其中胃腺癌组和胃良性病变

8、组之间的差异有统计学意义(PO．05)。miR-1246的相对表达水平在