hbv核心蛋白突变体重组质粒的构建及其拮抗ifn-抗病毒机制的研究

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1、分类号：密级：UDC：编号：学位论文HBV核心蛋白突变体重组质粒的构建及其拮抗IFN-抗病毒机制的研究TherecombinantplasmidconstructionofthemutantcoreproteinsofHBVandthestudyofitsantagonisticactionontheantiviralmechanismofinterferon-α孙蓓蓓指导老师姓名管世鹤教授安徽医科大学第二附属医院申请学位级别硕士专业名称临床检验诊断学提交论文日期2014年3月论文答辩日期2014年5月学位授予单位学位授予日期答辩委员会主席沈

2、继龙教授评阅人王书奎张平安2014年3月安徽医科大学ANHUIMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文论文题目HBV核心蛋白突变体重组质粒的构建及其拮抗IFN-抗病毒机制的研究TherecombinantplasmidconstructionofthemutantcoreproteinsofHBVandthestudyofitsantagonisticactionontheantiviralmechanismofinterferon-α姓名孙蓓蓓指导老师管世鹤教授学科专业临床检验诊断学研究方向分子病毒与免疫学论文工作时间2012年2月至

3、2014年3月2014年3月安徽医科大学硕士学位论文目录一、缩略词表………………………………………………2二、中文摘要………………………………………………3三、英文摘要………………………………………………5四、正文……………………………………………………71.前言……………………………………………………72.材料和方法……………………………………………93.结果……………………………………………………254.讨论……………………………………………………395.结论……………………………………………………436.参考文献…………………………………

4、……………43五、附录……………………………………………………49六、致谢……………………………………………………50七、综述……………………………………………………511安徽医科大学硕士学位论文中英文缩略词表英文缩写英文全名中文全名HBVHepatitisBvirus乙型肝炎病毒HBcHBVcoreproteinHBV核心蛋白IFN-αInterferon-αα干扰素JanusKinase-SingalTransducerandActivatorofJanus激酶信号转导子和转JAK-STATTranscription录激活子STAT1Sin

5、galTransducerandActivatorofTranscription1信号转导子和转录激活子1STAT2SingalTransducerandActivatorofTranscription2信号转导子和转录激活子2IRF9IFNRegulatoryFactor干扰素调节因子9MxAMxGTPaseA抗粘病毒A蛋白PKRproteinkinaseR蛋白激酶RSOCS3Suppressorofcytokinesignaling3细胞因子信号转导抑制物32'-5'OAS2'-5'Oligoadenylatesynthetase2'-5'

6、寡腺苷酸合成酶ReversetranscriptionpolymerasechainRT-PCR逆转录PCRreactionPCRPolymerasechainreaction聚合酶链反应PBSPhosphateBufferSolution磷酸盐缓冲液Sodiumdodecylsulphatepolyacrylamidegel十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰SDS-PAGEelectrophoresis胺电泳ORFopenreadingfragment开放读码框-2安徽医科大学硕士学位论文HBV核心蛋白突变体重组质粒的构建及其拮抗IFN-抗病毒机制的

7、研究摘要目的构建HBV核心蛋白（HBc）突变体L60V，I97L，S85G重组质粒（pEGFP-L60V，pEGFP-I97L，pEGFP-S85G），以探讨HBV核心蛋白（HBc）拮抗α干扰素（IFN-）抗病毒活性及其相关机制。方法以质粒p3.8Ⅱ为模板PCR法扩增HBc基因，与真核细胞表达载体pEGFP-N1连接构建pEGFP-HBc-WT，通过定点突变技术构建HBc突变体融合表达载体pEGFP-L60V，pEGFP-I97L，pEGFP-S85G；应用荧光显微镜及Westernblot技术进行质粒鉴定。将构建好的重组质粒通过脂质体分别转

8、染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞，运用荧光显微镜及Westernblot法分析其在细胞中的表达及细胞亚定位；以RT-PCR及Westernblot法检测