flt-1在肺癌细胞穿过血脑屏障中的作用

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1、。、厂00S323分类号R734．2单位代码：10159学号：200321020审回錾升失孽硕士学位论文题目：Fk一1在肺癌细胞穿过血脑屏障中的作用FunctionofFit一1inLungCancerMigrationthrou曲BBB研究生：营立业导师：陈誉华学科专业：一．蕉直圭堑生．论文课题起止时间：2004年2月一2006年4月论文完成时间：2006年6月中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以

2、标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。．L论文作者签名：彭定力杉日期：悄6．6论文作者签名：匕筮丝日期：竺鱼：垒中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发

3、表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：．诫渺衍Cj至噩亘=)Fit一1在肺癌细胞穿过皿脑屏障中的作用目的对于小细胞肺癌(Scle)病人来说，脑转移是一个重要的死亡原因，并且术后治疗很不理想，小细胞肺癌病人在诊断时大约10％发生脑转移，两年后则

4、为80％。脑转移是一个复杂的连续的过程，包括癌细胞从原发灶侵袭到血管或是淋巴系统，在新环境下存活，血管内转移到远处的器官，黏附到内皮细胞上，穿过血管进入软组织，伴着新血管系统的形成而长成继发性脑瘤。由于小细胞肺癌具有明显的选择性器官转移，并且已有研究表明：粒性白细胞和乳腺癌穿过内皮细胞单层同TJ的破裂有关，因此深入研究Sclc穿过人的血脑屏障(blood—brainbarrier，BBB)进行脑转移的分子机制具有重要的临床意义。研究证实：Fit—l和它的配体在血管生成过程中发挥重要的作用，血管内皮细

5、胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)也叫做血管渗透因子(vascularpermeabilityfactor，VPF)，在包括肺癌的几种恶性肿瘤中表达，VEGF是一个潜在的血管调节因子，对血管的形成起着重要的作用，因此VEGF的表达可能是一个指示计，他标志着肿瘤具有了血管化的潜能和生物性的侵袭能力，VEGF与内皮细胞受体结合发挥调节作用，主要受体包括VEGFR一1(vascularendothelialgrowthfactorreceptor一1；f

6、it一1；fms—liketyrosinekinase)、VEGFR一2(flk一1；KDR；kinase—insert—domain—containingreceptor)、VEGFR一3和neuropilin一1。FLt一1同其他受体具有很高的同源性，包括：细胞外七个免疫球蛋白样结构、一个跨膜结构和胞内酪氨酸激酶结构，Fh一1是一种表达全长的酪氨酸受体，在一些情况下，它又存在着一种可溶形式，即仅仅表达细胞外的区域。在生物化学方面，Fit一1与VEGF的亲和力至少比KDR／Flk一1高10倍，但是

7、它的酪氨酸活性却只有KDR／Flk一1酪氨酸活性的十分之一左右，并且Fh一1也可以特异性的同胎盘生长因子(placentagrowthfactor，PL·】·GF)结合。最近研究表明VEGF／flt一1通路在肺癌的形成、侵袭和转移过程中也起着重要的调节作用，因此我们推测FLt一1这个酪氨酸受体在Sclc穿过血脑屏障过程中可能也发挥作用，本研究旨在通过建立体外Sclc和HBMEC作用模型来研究Fh一1在整个过程中所发挥的作用，据此推测是否可以通过影响Fit一1的作用来为临床上治疗肺癌脑转移提供新的理论

8、基础。方法1NCI—H209细胞和人脑微血管内皮细胞(humanbrainmicrovascularendothelialcells，HBMEC)的培养2NCI—H209细胞穿过内皮细胞转移的分析2．1建立体外血脑屏障模型：HBMEC的培养和增殖以形成单层细胞和紧密连接2．2NCI—H209细胞和HBMEC细胞的相互作用3WesternBlot方法分析Fit一1的表达4免疫荧光方法分析F—actin和Zo一1的表达结果1NCI—H209穿过脑内皮细胞的转移能引起HBM