dna甲基化调节转基因小鼠外源基因表达的研究

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1、万方数据StudyofDNAmethylationregulatingtransgeneexpressionintransgenicmiceThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomy1一一ZhouYang(CollegeofAnimalScienceandTechnology)Supervisor：Prof．PanQingjieQingdao．China万方数

2、据学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者签名：签字日期：钟年f月估日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有

3、关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：用砌签字目期：沙J牛年5月谚FI导师签字：签字目期：枷仲年6月岱日、勿／，f．万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要DNA甲基化调节转基因小鼠外源基因表达的研究摘要近年来，转基因动物已被应用于研宄基因功能，提高动物的生产性能，建立器官模型等方面。然而，成功获得转基因动物并不是转基因动物研究的最终目的，通过转基因技术为人类的需求服务才是亟需解决的问题。在转基因动物中外源基因的遗传和表达稳定性已经引起研究

4、者们的广泛关注，并且仍然是转基因动物遗传育种迈向产业化的绊脚石。在本研究中，我们发现同一寓的纯合转基因小鼠的绿色荧光表型不同，Y-j了探讨其潜在的分子机制，我们vXGAG启动子驱动绿色荧光蛋白基因(Egfp)袁达的转基因小鼠为研究对象，以外源基因露印为研究目标，通过实时荧光定量PeR，蛋白质印迹和重亚硫酸盐测序法检测在不同绿色荧光表型的转基因小鼠中各组织的外源基因审加表达水平，DNA甲基转移酶的表达水平：GAG启动子区的DNA甲基化水平，Egfp基因编码区的DNA甲基化水平以及对其表达水平和DNA甲基化水平之间建立相关性分析

5、。主要研究结果如下：1．在纯合转基因小鼠的各个组织中，外源基因审场的表达水平各不相同，且差异显著(P<0．05)。2．在绿色荧光袁型不同的纯合转基因小鼠的同种组织中，外源基因露砀在mRNA和蛋白水平的表达均不相同，且差异显著(P<0．05)。3．通过建立外源基因露砀表达和OAG启动子区DNA甲基化之间的相关性分析发现，外源基因露巾表达受到GAG启动子区DNA甲基化的负调控作用(rI,2=一0．75，尸<0．01)；然而，建立外源基因Egfp表达和Egfp基因编码区DNA甲基化之间的相关性分析发现，Egfp基因编码区DNA甲基

6、化对外源基因Egrp的裹达没有明显的调控作用(r”=一O．41．P>0．05)。4．通过分别建立OAG启动子区DNA甲基化和DNA甲基转移酶Dnm七1，Dnmt3a，Dnmt3b表达之间的相关性分析发现，仅Dnmt3b的表达与CAG启动子区DNA甲基化呈正相关关系(r：．。=0．80，P<0．01)。在本研究中，通过Dnmt3b相关的CAB启动子区DNA．旱基化抑制了外源基因的表达，并导致在同一窝后代中的纯合转基因小鼠的外源基因表达不稳定。关键词：转基因小鼠：EGFP：CAG启动子区：Egfp基因编码区；DNA甲基化万方数据

7、童墨壅些查兰壁兰篁笙垄竺型——————————————————_——————_———’——————_—————————————————————●———————————————————————一一一一。～⋯一～StudyofDNAmethylationregulatingtransgeneexpressionintransgenicmiceAbstractTransgerdeanimalshavebeencreatedforstudyinggenefimction，improvinganimals’productiontrai

8、ts，providingorganmodelsforthestudyofhumandiseases．However,theultimateaimof拄ansgenesisisnottoproduceseveraltransgenicanimals，buttoserviceforthenee