cyr61在增殖型糖尿病视网膜病变患者玻璃体液中的表达及其对muller细胞的作用

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文答辩委员会主席：堂明昌塾拯答辩委员会成员：汪塑田数援盆墨熬拯论文答辩El期：2Q!垒1512万方数据目录

2、IUllIIIIIIIIIIIIIIIIII—Y2691593一缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1二中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。3三英文搐要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5四前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。7五实验对象和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。10六结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯27七分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。32八结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。35九参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36十附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41十一致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。42十二文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43十三参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。50十四独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54万方数据温州医科大学硕士学位论文缩略词表1万方

4、数据温州医科大学硕士学位论文2万方数据温州医科大学硕士学位论文Cyr61在糖尿病视网膜病变患者玻璃体液中的表达及其对MOiler细胞的作用摘要目的：检测增殖性糖尿病视网膜病变(proliferativediabeticretinopathy，PDR)患者玻璃体液中的富含半胱氨酸蛋白(Cysteinerich61，Cyr61)的含量，探讨体外培养的人Miiller细胞在高糖条件下能否表达Cyr61mRNA和蛋白，及Cyr61对人Mialler细胞迁移、凋亡等影响。方法：使用酶联免疫吸附法(enzyme．1inkedimmunosorbentassay，ELISA)检测20

5、名(20眼)PDR患者和12名(12眼)特发性黄斑裂孔和特发性黄斑前膜(idiopathicmacularhole／idiopathicmacularepiretinalmembrane，IMH／IEM)患者玻璃体液Cyr61的含量。PDR患者20名作为实验组，其中PDR无视网膜脱离者10名，PDR伴视网膜脱离者10名；特发性黄斑裂孔或特发性黄斑前膜患者12名作为对照组。在基因水平，通过RT．qPCR(realtime．qPCR)技术，检测人Mtiller细胞在高糖条件下(5、10、20mM)是否表达Cyr61mRNA，进而检测人Mialler细胞在不同时间(4、6、8

6、、24h)Cyr61mRNA的表达。在蛋白水平，通过westernblot技术，检测人M试ler细胞在高糖条件(5、10、20mM)是否表达Cyr61蛋白。将浓度分别为0、10、30、100、300ng／mL的Cyr61分别加入人Mtiller细胞中培养24h和48h，通过MTT比色法检测Cyr61对人Miiller细胞存活率的影响。通过Transwell技术，观察不同浓度Cyr61(0、3、10、30、100、300ng／mL)对人Miiller细胞迁移的影响。再通过TUNEL实验，检测不同浓度Cyr61(0、30、300ng／mL)对人Miiller细胞凋亡的影响。

7、结果：1．ELISA结果显示：PDR组玻璃体液Cyr61的含量(3576．92±1574．58pg／mL)显著高于对照组(436．14±130．69pg／mL)，差异具有统计学意义(Mann-WhitneyUtest，P=0．002)。实验组中，PDR不伴有视网膜脱离组玻璃体液Cyr61含量为4988．90±1058．80pg／mL，比PDR伴有视网膜脱离组Cyr61含量(2341．43±509．44pg／mL)高2倍多，两组相比，差异有统计学意义(Mann-WhitneyUtest，P=0．013)。2．RT．qPCR结果显示：Cyr61mRNA在10mM糖浓度时开始

8、增高，当糖浓度为20mM时，Cyr61mRNA表达最高，呈在剂量依赖模式，糖的剂量越高，3万方数据温州医科大学硕士学位论文其刺激人Mialler细胞Cyr61mRNA表达效果越明显。进一步发现Cyr61mRNA在高糖(10mM)刺激人Mtiller细胞8h开始增高，在24h时Cyr6mRNA表达最高，呈时间依赖模式，刺激时间越长，人Mtiller细胞表达Cyr61mRNA效果越显著。3．Westernblot结果显示：Cyr61蛋白在10mM糖浓度时开始增高，20mM时达到高峰，也呈在剂量依赖模式，糖的剂量越高，其刺激人Mtiller细胞