线粒体dna d-loop区16390和16519位点基因多态性与晚期非小细胞肺癌预后的关联性研究

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1、河北医科大学硕士学位论文线粒体DNAD--Loop区16390和16519位点基因多态性与晚期非小细胞肺癌预后的关联性研究姓名：薛金良申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：王瑞201203中文摘要线粒体DNAD．Loop区16390和16519位点基因多态性与晚期非小细胞肺癌预后的关联性研究摘要目的：肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发病人数和死亡人数在全球肿瘤中均居首位，且发病趋势仍在上升。肺癌只有不到15％的五年生存率，极大威胁人类的健康和生命。该病发病年龄多在40岁以上，60．-一79岁之间是其发病年龄高峰。男女的发病比例为2．3

2、：1。肺癌中非小细胞肺癌约占75％，主要包括鳞癌、腺癌、大细胞癌，小细胞癌约占25％。环境因素与肺癌的发生有密切关系，虽然未能完全阐明肺癌的发病机制，但大量研究证实肺癌的发生是一个多因素参与、包含多阶段的过程，是环境等危险因素和遗传因素等多方面因素共同作用导致了肺癌的发生。近年来，分子生物学技术发展突飞猛进，对各种肿瘤的研究进入了分子水平，人们开始研究肺癌相关基因在肺癌发病过程中的作用。研究发现，不仅细胞核内的基因改变与肺癌的发生有关，线粒体DNA的突变也可引起肺癌的发生。对mtDNA突变与肺癌的关系的研究可以使人们对肺癌的发生发展有更进

3、一步的了解，为肺癌的诊断提供理论依据，为其临床治疗及预后提供指导和预测。MtDNA是双链闭环分子，长16569bp，两条链分别具有独立的编码功能。MtDNA包含有编码区和非编码区(D—loop区)两个区域。有37个基因在编码区编码，D．100p区位于16026np．577np，占mtDNA全长的6％左右，包含有3个高变区(HVR)，是mtDNA唯一的非编码区和复制起始位点，对mtDNA的功能起重要作用，可以调控其转录与复制过程。MtDNA作为核外重要的遗传物质，在细胞核外进行独立复制、转录和翻译，自我复制能力非常活跃。由于mtDNA自身基

4、因结构特殊，且自身修复体系不完善，较nDNA更容易被各类诱变因素损伤而发生突变。近年来，在肺癌的研究中，发现线粒体DNAD．100p区存在较高的变异。但关于mtDNA基因位点多态性与肺癌预后的关系尚未见报道。本实验主要研究mtDNAD．100p区16390A．G、16519T-C位点基因多态性及临床特征对晚期(Ill／IV期)非小细胞肺癌(non．smallcelllungcancer，NSCLC)生存期中文摘要的影响，为预测晚期二ilz+细胞肺癌患者生存期提供理论依据。方法：采集54例就诊于河北医科大学第四医院的晚期非小细胞肺癌患者外周

5、血5ml(患者均经组织病理学和／或细胞病理学明确诊断)，于采血一周内通过蛋白酶K消化．饱和氯化钠盐析法提取其白细胞线粒体DNA，用引物介导的限制性聚合酶联反应(primer-introducedrestrictionanalysisPCR，PARA．PCR)对MtDNAD．100p区进行PCR扩增，扩增产物送往上海生物工程技术服务有限公司，对其进行纯化和测序，并与剑桥标准人类线粒体DNA序列(RACambridge序列)进行比对，检测mtDNAl6390、16519位点的基因多态性。同时记录患者临床资料并进行随访，观察其生存期。数据统计分

6、析采用SPSSl3．0版软件包(sPssCompany,Chicago，Illinois，USA)进行，所有统计结果以P<0．05认为有统计学意义，用Kaplan-Meier法(乘积限法)绘制生存曲线，用log．rank法(对数秩和检验)分析单因素生存期的差异，用COX比例风险回归模型对多个预后影响因素进行分析，计算其相对危险度(RelativeRisk，RR)及其95％可信区间(ConfidenceInterval，CI)。结果：1MtDNAl6390G从基因位点A多态性碱基出现率为7．41％(4／54)。16519T／C基因位点C多态

7、性碱基出现率为38．9％(21／54)，出现率大于10％。2全组患者随访率100％，生存时间为1～100个月，中位生存期为16．oo个月，1年生存率为62．96％，2年生存率为29．62％，5年生存率仅为5．56％。3MtDNA16390位点携带G、A两种碱基的患者中位生存期分别为17．oo个月、6．50个月，G碱基携带者较A碱基携带者生存期延长(P

8、者生存期延长(P