电针对溃疡性结肠炎大鼠肠道微生态的保护作用研究

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1、学位论文．AstudyoftheprotectiveeffectofElectro-Acupunctureon．{——一．g．．．．．．．u．．．．．．．．t．．．．．．．．m．．．．i．．．c．，．．．．．r，．．．o，．．—fl—o—ra—inr—at—sw—i—thulcerativecolitis．韩晓霞申请学位级别：亟±专业名称：钍鱼推垒堂论文提交时间：2Q羔2生垒且论文答辩时间：2Q堇至生量且二。一二年五月成都中医药大学2009级硕士学位论文目的：中文摘要删咖㈣洲㈣㈣Ⅲ0IY2519694研究电针对溃疡性结肠炎(Ulcerati

2、veColitis，UC)模型大鼠肠道菌群多样性和丰度的影响，明确电针对肠道微生态的保护作用和影响的关键菌群，从“肠道微生态”这一全新角度研究针灸对UC的治疗作用，为深入探讨针灸治疗肠道疾病的作用机理提供基础，并进一步对针灸学理论与现代生物技术的有机结合提供新的研究方向。方法：39只健康雄性SD大鼠随机分为空白组和UC模型组，模型组饮用4％的葡聚糖硫酸钠(DextranSulfateSodium，DSS)溶液复制溃疡性结肠炎模型，造模成功后再按体重随机分为模型组和电针组。电针组选取“天枢”“足三里”“上巨虚”进行治疗，5天为一疗程，空白组和

3、模型组不作治疗。采用疾病活动指数(DiseaseActivityIndex，DAI)比较各组大鼠的一般活动状况；采用联苯胺法评价各组粪便隐血情况；采用组织病理染色切片和透射电镜等方法研究回盲部和远端结肠组织病理形态学的变化。收集各组大鼠粪便排泄物，采用变性梯度凝胶电泳(DenaturingDradientGelElectrophoresis，DGGE)等分子生态学方法研究肠道菌群的多样性、相似性及丰度；对优势条带进行主成分分析(PrincipalComponentAnalysis，PCA)模式识别分析；特异条带回收测序，鉴定菌种；所得结果及

4、数据采用Quantityone、Chromas、MGAE5、SIMCA-P+及SPSSl8．0等软件进行分析。结果：1．电针对UC模型大鼠的治疗效应观察结果：1)DSS诱导溃疡性结肠炎后，模型大鼠一般状况差，大便出现脓血，DAI评分显著增高：电针治疗组大鼠精神状况明显好转，大便性状、脓血便等情况得到明显改善，DAI评分下降，组间比较差异有统计学意义(P<0．05)。2)光镜观察结果显示，与空白组相比，UC模型组回盲部及远端结肠组织粘膜层结构破坏，溃疡形成，粘膜下层充血水肿，大量炎细胞浸润，杯状细胞减少，大量的游离的坏死组织；电针治疗组肠粘膜

5、结构完整，腺体排列较整齐，粘膜下层无明显充血水肿，只有少量炎细胞浸润，可见杯状细胞增生。．1．成都中医药大学2009级硕士学位论文3)电镜观察结果显示，与空白组相比，模型组回盲部及远端结肠组织微绒毛稀疏，变短，上皮细胞间有大量空泡，线粒体肿胀，炎细胞广泛浸润。电针治疗组微绒毛相对整齐，线粒体正常，细胞核染色质分布均匀，胞浆均匀，粗面内质网丰富。2．电针对UC大鼠肠道菌群的保护作用研究结果：I)DGGE凝胶电泳显示，与空白组相比，UC模型组肠道菌群的丰度及多样性指数明显降低(P．(0．05)，差异有统计学意义；电针组肠道菌群的丰度及多样性指数

6、较模型组有明显增高(p<0．05)，差异有统计学意义。2)克隆测序结果：样本菌种鉴定主要归属于拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)及变形菌f-j(Proteobacteria)这三大类，其中拟杆菌门可培养出的细菌种类主要有Bacteroidescoprocola，还有一些未培养拟杆菌；厚壁菌门可培养出的细菌种类主要有Lactobacillussp．、Lactobacillus／ohnsonii、Clostridiumbifermentans；变形菌门可培养的细菌种类有Anaerobiospirillums

7、ucciaiciproducens，Lawsoniaintracellularis，其中Lactobacillussp．与Lactobacillusjohnsonii针刺后其含量增加，与模型组比较差异有统计意义；Clostridiumbifermentans其含量在模型组显著升高，高于正常组，针刺之后其含量显著下降，差异有统计学意义(尸≮0．05)。结论：1．电针对DSS诱导的UC模型大鼠一般情况和肠道远端及回盲部粘膜组织病理改变有明显的改善作用。2．UC模型大鼠肠道内细菌丰度及多样性明显低于正常对照组，电针能提高UC大鼠肠道细菌的丰度及多

8、样性，表明电针对肠道细菌多样性有良性保护作用。3．电针可增加Lactobacillussp．、Lactobacitlusjohnsonii等肠道益生菌的含量，减少Clost—di