沉默atf5对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

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1、青岛大学硕士学位论文沉默ATF5对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响姓名：齐亚妮申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：陈爱平20120610摘要目的l探讨显性负抑制人转录激活因子5(Activatingtranscriptionfactor5，ATF5)对卵巢癌细胞体外增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法。1．采用RT-PCR和Wegem．blot检测SKOV-3、A2780、OVCAR8卵巢癌细胞系中ATF5的表达情况，筛选出ATF5高表达细胞系。2．采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP．C1-NTAzip-ATF5和

2、pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞，同时设空白对照组。3．采用MTT及AnnexinV／7．AAD双染法流式细胞术检测转染后不同时间点各组细胞的增殖活性变化及早期凋亡情况。4．采用M1vr检测不同浓度的顺铂作用24h后上述三组细胞的增殖情况。5．采用流式细胞术检测4umol／L顺铂作用Oh、12h、24h、48h后各组细胞的凋亡。6．采用Western．blot检测显性负抑制ATF5联合顺铂作用后，下游基因bel-2蛋白表达情况。结果：1．ATF5在SKOV-3细胞中的表达明显高于其它两株卵巢癌细胞，表达差异有统计学意义(P

3、

4、指导教师陈爱平教授关键词：ATFS；上皮性卵巢癌；细胞增殖；细胞凋亡；化疗敏感性AbstractObjectiveToinvestigatetheeffectofATF5genesilencedbydominantnegativeongrowth，apoptosisandchemosensitivityofovariancarcinomacells．Method1．TheexpressionofATF5indifferentovariancarcinomacelllinesweredetectedbyRT-PCRandWestern

5、blot．2．ThepLeGFP-C1-NTAzip-ATF5andpLeGFP·ClrecombinantplasmidswererespectivelytransfectedintoSKOV-3ceilswithLipofectamineTM2000reagent．3．MTTandFlowcytometrywasrespectivelyusedtoevaluatetheproliferationandapoptosisratesofcells，whichwasinterfered诵tllthefunctionofATF5．4．T

6、hecellswereexposedtocisplatinatdifferentconcentrationsfor24hours．TheproliferationwasassayedbyMTT．5．Aftertransfection24hours，thecellsweretreatedwith4umol／Lcisplatinatdifferenthours(Oh，12h，24h，48h)，flowcytometryWasusedtodetectapoptosis．6．Theexpressionofbcl-2proteinwasdet

7、ectedbywesternblot．Results1．TheexpressionofATF5inSKOV-3WaSthehighestamongthethreekindsofovariancancercelllines，theexpressiondifferenceWasstatisticallysignificant妒<0．05)．2．TherecombinantplasmidCanefficientlyandspecificallyinhibittheexpressionofATF5gene．Lossofthefunction

8、ofATF5ledtoapoptosisofSKOV-3cells，especiallyintheearlystage．3．Comparedwiththenonspecificandcontrolgroup，thegrowthinhi