mdr1基因多态性对富马酸卢帕他定吸收影响的机制研究

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1、南昌大学硕士学位论文MDR1基因多态性对富马酸卢帕他定吸收影响的机制研究姓名：杨婧芝申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：熊玉卿201206摘要背景：富马酸卢帕他定为新型、强效的组胺Hl受体及血小板活化因子(PAF)受体双重拮抗剂，该药口服生物利用度低，且吸收程度存在较大的个体差异。由MDRl基因编码的外排转运体P-gp对已吸收药物的主动外排可能是导致富马酸卢帕他定体内生物利用度低，个体差异大的主要原因。本课题通过体外模型探讨富马酸卢帕他定基于P．gp介导的外排机制，再进一步研究MDRl基因多态性对富马酸卢帕他定体内吸收的影响，探讨富马酸卢帕他定人体口服吸收

2、存在个体差异的缘由，对指导富马酸卢帕他定个体化用药有重要的临床意义。目的：本课题通过建立Caco．2单层细胞模型研究P．gp对富马酸卢帕他定吸收的影响，在此基础上进一步探讨P．gp编码基因MDRl基因多态性对富马酸卢帕他定在中国健康人体药代动力学特征的影响，为RUP的个体化合理用药及临床疗效评估提供理论参考依据。方法：1．建立并评价Caco．2单层细胞模型特征，用以体外试验探究P—gp对富马酸卢帕他定吸收的影响。2．通过双向转运试验了解富马酸卢帕他定在Caco．2单层细胞模型上的转运特性，比较P．gp抑制剂维拉帕米存在与否时，卢帕他定跨Caco一2细胞膜转运的

3、不同之处，探究富马酸卢帕他定在Caco-2细胞细胞模型上的转运是否被P—gp所介导。3．在探明富马酸卢帕他定是P—gp的底物的基础上，采用PCR-RFLP方法对22名中国汉族健康志愿者进行全血MDRlC3435T基因分型，而后展开富马酸卢帕他定药代动力学试验，采集系列血样，利用HPLC．MS／MS方法测定血药浓度。4．采用DAS2．1软件计算富马酸卢帕他定健康人体药代动力学参数，采用方差分析和独立样本t检验比较不同基因型组(MDRlC3435C、MDRlC3435T、摘要MDRlT3435T)之间的主要药代动力学参数的差异。结果：1．Caco-2细胞生长情况良

4、好，分布均匀，边界清晰。培养22～25后TEER值>500f2·cm2，且Caco．2细胞出现了明显的极化现象；在5～409M浓度范围内，Caco．2细胞对富马酸卢帕他定摄取量呈线性，20min内摄取量逐渐上升，而后趋于稳态；PH为7．4时，Caco．2细胞的摄取量最大；所建立的Caco．2细胞单层模型符合小肠特征，可用于下一步的转运抑制试验。2．通过在Caco．2细胞单层模型上的双向转运试验，结果表明富马酸卢帕他定的转运有明显的方向性，提示可能受到某种外排作用的影响，因而加入P．gP专属性抑制剂维拉帕米探讨富马酸卢帕他定在跨膜转运过程中是否受到P．gp介导，

5、结果表明，加入P．gP抑制剂维拉帕米后，富马酸卢帕他定在Caco．2单层细胞转运模型中的表观渗透系数发生显著改变，表观渗透率由5．426下降至1．339，结果提示富马酸卢帕他定很有可能是P．gP的底物。3．P—gp的表达和功能受编码基因MDRlC3435T位点调控，通过PCR—RFLP法对健康受试者进行全血基因分型，22名受试者MDRlC3435T基因分型结果：MDRlC3435C基因型(简称CC型)10人，MDRlC3435T基因型(简称CT型)9人，MDRlT3435T(简称TT型)3人，该基因分布频率与文献中报道的中国人群中MDRlC3435T突变率接近

6、，满足研究分析的样本类型。4．三种不同基因型受试者的主要药代动力学参数的差异具有统计学意义：CC、CT、TT、型组的Cmax分别为18．9l士7．20ug／L、14．90-土6．04ug／L和12．52+7．49ug／L、TT型组的Cmax显著低于CC、CT型组。AUCo．c和AUCo一。在TT型组中也显著低于CC、CT型组，TT型组的AUCo．t和AUCo。分别为(29．72+24．79ug／L术h、31．01+25．74u∥L水h)，CC和CT型组的AUCo—t和AUCo．。分别为(47．46土15．02ug／L半h、49．88+16．42ug／L铀)和(

7、49．30+14．22ug／L*h、51．73+15．64ug／L术h)TT型组的Tm缸(O．58+0．14h)也显著低于CC型组(0．83士0．29h)和CT型组(1．11-4-0．22h)而TT型的CLz(468．45+264．42L／h)略高于CC型组(234．36+130．38L／h)矛HCT型组(206．53土50．05L／h)，但差异无统计学意义。结论：本研究建立了符合药物转运试验的Caco一2细胞单层模型，通过双向转运实验表明富马酸卢帕他定跨膜转运具有显著地方向性，加入P．gP抑制剂维拉帕米¨T摘要后，显著地抑制P．gP对富马酸卢帕他定的外排作用

8、，提示富马酸卢帕他定可能是P—gP的底