ini1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生长、增殖及侵袭能力影响的研究

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1、河北医科大学博士学位论文INI1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生长、增殖及侵袭能力影响的研究姓名：王晓春申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：李勇；范立桥201204中文摘要I⋯1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生长、增殖及侵袭能力影响的研究摘要胃癌是常见人类恶性肿瘤，其发病率为全世界癌症发病率的第四位，死亡率为全世界癌症的第二位。在日本、中国、东欧和拉丁美洲其发病率最高。尽管经过手术切除、化疗和放疗，其五年生存率仅为40％左右。遗传因素、生活方式、幽门螺杆菌感染等多种因素都会导致胃癌的发生。然而，胃癌发生发展的分子机制仍需进一步阐明。整合酶相互作用分子l(integrasein

2、teractorl，INll)基因又名hSNF5、BAF47，是依赖ATP的染色质重塑复合物SWI／SNF的核心亚基。染色质重塑复合物hSWI／SNF可使染色质的压缩结构松弛并促进转录。已知INll在细胞增殖、分化、细胞抗病毒、抑制肿瘤形成中发挥着重要的作用。在横纹肌样肉瘤、滑液膜恶性肉瘤、上皮样肉瘤、神经鞘瘤等多种肿瘤中INll是一个肿瘤抑制因子。然而目前，INll在胃癌的发生、发展中的作用及INll抑制肿瘤的作用机制目前还不十分清楚。因此，本研究以临床胃癌样本及胃癌细胞系SGC7901为研究对象，通过基因转染，运用免疫组织化学、流式细胞术、荧光定量RT-PCR、Weste

3、m．blot等技术系统研究INll对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用，以阐明INll在胃癌发生发展过程中的重要性。lINll在胃癌组织及胃癌细胞中的表达及意义目的：本部分实验旨在探讨不同分化程度胃癌组织和不同分化的胃癌细胞株中INll的表达情况及意义。方法：通过荧光定量RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学染色检测临床不同分化程度胃癌标本及癌旁组织中1-Nil的表达情况；检测不同分化的胃癌细胞株MKN28、SGC7901、BGC823与胃黏膜上皮细胞GES．1中INll的表达情况。结果：1．1IYll在不同分化程度胃癌组织和癌旁对照组织中的表达差异：INll的表达由

4、高到低为：癌旁组织、高分化、中分化和低分化胃癌组织。中文摘要结果表明，INll基因在胃癌组织中表达降低，并与胃癌分化程度有关，即随着肿瘤分化程度的下降，INll的表达逐渐降低。1．2INll基因在不同分化胃癌细胞株中的表达差异：INll的表达由高到低的顺序为：正常胃黏膜上皮细胞GES．1、人胃高分化腺癌细胞株MKN．28、人胃中分化腺癌细胞株SGC．7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC．823。由此可见，INll基因表达与胃癌细胞株分化程度有关，即随着肿瘤分化程度的下降，N1的表达逐渐降低。综上所述，体内和体外胃癌细胞中，N1基因表达均下降，且INll表达与癌细胞分化程度有关

5、。小结：胃癌组织中INllmRNA及蛋白表达较癌旁组织降低，且胃癌分化程度越低的肿瘤INll的表达水平越低；胃癌细胞株中INllmRNA及蛋白表达较胃黏膜细胞株降低，且胃癌细胞分化程度越低的N1的表达水平越低。说明INll可能作为抑癌基因对胃癌发生发展及侵袭有重要的抑制作用。2INll基因对人胃癌SGC．7901细胞增殖活性及相关基因的影响目的：本部分实验通过基因转染提高INll的表达水平，观察INll对胃癌细胞株SGC7901增殖活性的影响，并对其机制进行探讨。方法：构建GFP．N1．INll真核表达质粒并转染进入中分化胃癌细胞株SGC7901，应用MTT法、流式细胞术、荧

6、光定量RT-PCR、Westernblot等技术检测转染前后胃癌细胞增殖能力的变化及其机制。结果：2．1INll对SGC7901细胞增殖活力的影响：Westernblot检测证实INll．GFP在SGC7901细胞中得到高效表达。MTT及细胞计数实验结果显示，转染INll．GFP使SGC7901细胞增殖活性下降，表明INll具有抑制细胞增殖的作用，是一个增殖抑制基因。2．2N1对SGC7901细胞周期分布的影响：流式细胞术结果表明，SGC7901细胞转染Nil．GFP后，处于S期的细胞明显减少，而处于GO／G1期的细胞显著增加。可见Nil能够明显抑制SGC7901细胞周期进程

7、，阻滞细胞周期于G0／G1期，而INll表达下降或缺失可使加速细胞周期进程。2．3INll对SGC7901细胞周期相关基因表达的影响：结果显示，INll．GFP转染SGC7901细胞后，CyclinD1、CyclinA的表达明显降低，2中文摘要P21和P16的表达显著升高。综上所述，INll通过影响周期相关蛋白表达影响SGC7901细胞周期进程，进而在细胞增殖中发挥重要作用。小结t成功构建了INll．GFP真核表达载体，明显提高了INll在细胞株SGC7901中的表达。转染INll．GFP真核表达载体后