hnrnpa2b1基因抑制对乳腺癌mcf-7和mda-mb-231细胞周期、增殖和凋亡的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文hnRNPA2B1基因抑制对乳腺癌MCF--7和MDA--MB--231细胞周期、增殖和凋亡的影响姓名：胡滢申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：王继见201205重庆医科大学硕士研究生学位论文hn刚PA281基因抑制对乳腺癌MCF-7和帅卜MB_231细胞周期、增殖和凋亡的影响摘要目的HnRNPA281属于广泛表达的核内不均一核糖蛋白类的(hnRNPs)A／B亚科。HnRNPA2Bl过表达已在许多癌症中有所报道，这其中包括乳腺癌，胰腺癌，肝癌和胃肠道癌症等等。据报道它在与癌症相关的基本生物学过程中起到关键性的作用。沉默hnRNPA281基因从而抑制癌细胞生长已在多

2、种类型的癌症中得到验证，但在乳腺癌方面尚未有单独报道。为了证实这一问题，我们运用基因沉默技术靶向沉默乳腺癌McF一7和硒A—皿一231中hnRNPA281基因，观察细胞增殖、凋亡和细胞周期的变换。方法构建hnRNPA281／shRNA质粒三对和阴性对照一对，分别转染乳腺癌细胞从而抑制乳腺癌细胞系MCF一7和肋A—船一23l中hnRNPA281基因的表达。之后，运用实时定量PCR技术对队基因抑制率进行观察和分析，并筛查出抑制率相对较高的质粒做进一步稳定转染。运用Westernblot技术检测稳定转染细胞株和阴性对照细胞株中hnRNPA281的蛋白表达水平并做定量分析。由MTT法检测细胞24h、

3、48h和72h增殖情况。流式细胞仪(FCM)分析细胞周期分布和细胞凋亡率。3结果通过使用RNAi技术，我们成功靶向抑制了hnRNPA281基因在mRNA和蛋白水平的表达，并成功建立稳定转染细胞株。这明显抑制了癌细胞72h的增殖率，增加细胞凋亡率，使细胞周期明显延长，并且使细胞阻滞于S期。经过统计分析，数据有统计学意义(P<0．05)。结论我们的研究结论表明，hnRNPA2Bl基因在乳腺癌细胞系MCF一7和MDA—MB_23l的细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期过程起到关键作用。这为hnRNPA2B1基因的进一步研究提供基础。关键词llll涨281；乳腺癌；RNA干扰4重庆医张大学硬士研究生拳l№丈

4、InhibitionofhnRNPA2／B1geneexpressionbyIⅢAinterferenceaa．ectedtheproliferation，ceUcycleandapoptosisinbreastcancerceUnnesMCF．7andⅧA．MB．231ObjeCtiveABSTRACTHnRNPA2B1belongstomeA／Bsub伽nilyofubiquitouslyexpressedheterogeneousnuclear曲onucleoproteins(bnRNPs)．HnRNPA2B1oV唧ressionhasbeendescribediIlm锄ycancer

5、s，includiIlgbreast，paIlcreas，liVerandgas仃oimestiIlalcelllines．AndithasbeellreportedⅡlathRNPA2Blplaysakeyroleinmeregulationof劬d锄entalbiologyespeciallyrelatedtocancer．Resultsofsilencing㈣PA2B1havebeenr印嘶edina-numberofbl咖ancancersbutnotinbreastcaIlcer．MetllodsToshedli曲tontllisissue，weusedsileIlciIlgtoo

6、lsiIlbreastcaIlcercellsliIleMCF-7andMDA-MB一231tostudyme矗mCtionof11llRNPA2B1．WreusedllIlIⅢPA2B1／sl删Astol(Ilock—outbnRNPA2／B1geneexpressioninthehlun觚breastcancercellliIlesM[CF．7觚dMDA．Ⅳ旧．231．Thenweperf．o姗edreal-timequ肌titatiVePCRandweStemblOttOdetecteXpresSionlevelsOfllIlRNPA2B1删[ⅢAandproteininstablet

7、rallsfectantsceUlines5重庆医科大学硬士研究生攀蚍文a11dnegatiVecon仃olcells．Cenprdiferationin24h、48hand72hwasexarninedbyaMTTassay．CenCycledistribu缸onaIld印optosisweredeteCl．edbyFlowCytomet巧(FCM)aIlalysis．I沁sultsW色discoVered