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时间:2019-02-21
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1、南昌大学硕士学位论文原花青素对人眼小梁细胞抗氧化损伤的实验研究姓名:石璐申请学位级别:硕士专业:眼科学指导教师:汪昌运201206摘要目的:研究原花青素(Procyanidins,PC)对过氧化氢(Hydrogenperoxide)处理的人眼小梁细胞(HumanTrabecularMeshworkCells,HTMC)抗氧化损伤的保护作用,为青光眼的临床治疗提供实验依据。方法:将正常人眼小梁细胞进行细胞传代后随机分为5组。未处理组:正常培养的HTMC,对照组:正常培养的HTMC+过氧化氢;实验组:正常培养的HTMc+过氧化氢
2、+PC(PC浓度分别为0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.10mg/m1)。应用实时荧光定量PCR方法检测线粒体复合物ImRNA(complexImRNA)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblot检测细胞色素C(cytochromeC,CytC)的释放。结果:I.与对照组相比,各实验组线粒体complexImRNA表达均增加,CytC释放均减少,细胞凋亡率均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。2.不同浓度PC组间随PC浓度增加complexImRNA表达增加,CytC释放减少,细胞凋亡率降低,各
3、浓度组间差异有统计学意义(P<0.01)。3.与未处理组相比,各PC组细胞凋亡率差异均有统计学意义(P0.05)。结论:外源性PC可以增加氧化损伤人眼小梁细胞线粒体complexImRNA的表达,减少CytC的释放,降低细胞凋亡率,有较强的抗氧化作用,并在一定浓度范围内随着浓度的增加其抗氧化作用逐渐增强,PC在青光眼的临床治疗中的作用值得进一
4、步研究。关键词:原花青素;小梁细胞;氧化损伤:青光眼Objective:AbstractABSTRACTToinvestigatetheprotectionandmechanismofProcyanidins(PC)againsthydrogenperoxideinducedoxidativedamageofHumanTrabecularMeshworkCells(HTMC)inordertOprovideanexperimentalfoundationforglaucomaclinicaltreatment.Methods
5、:HumanTrabecularMeshworkCellswereculturedandthendividedrandomlyinto5groups.Asuntreatedgroup:normalculturedHTMC;thecontrolgroup:thenormalculturedHTMC+hydrogenperoxide;thetreatedgroup:thenormalculturedHTMC+hydrogenperoxide+PC(PCfinalconcentrationswere0.02mg/ml,0.05mg
6、/m1.O.10mg/m1).ToinvestigatetheexpressionofmitochondrialcomplexImRNAwithreal—timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction(PCR),detectingthecellapoptosisratesbyflowcytometryandusingtheWesternblottestdetectedthereleasingofcytochromeCfcytc).Results:1.Thediffere
7、ncesbetweenPCtreatedgroupsandcontrolgroupwerestatisticallysignificant(P<0.01),whichisshowedHTMCtreatedwithPCCanincreasetheexpressionofmitochondrialcomplexImRNA,reducethereleasingofcytcandthecellapoptosisrates.2.ThedifferencesineachPCtreatedgroupswerestatisticallysi
8、gnificant(P
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