四氢原小檗碱同类物手性药代动力学及代谢研究

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1、第二军医大学硕士学位论文四氢原小檗碱同类物手性药代动力学及代谢研究姓名：张寅瑛申请学位级别：硕士专业：药物分析学指导教师：洪战英201206四氢原小檗碱同类物手性药代动力学及代谢研究摘要近年来，手性药物在临床上的应用已受到越来越广泛的关注，评价手性药物对映体间在体内的立体选择性特征，对于药物的安全、有效至关重要。手性药物对映体在药物代谢的立体选择性表现在药物的吸收、分布、代谢和排泄等各个环节。仅以消旋体的形式无法准确阐明手性药物在体内的动态变化，而应分别研究手性对映体的药动学特征、药物代谢酶影响及其代谢途径。本课题选择镇痛中药延胡索中的四氢小檗碱(tetrahydroberberine，

2、THB)和四氢巴马汀(tetrahydropalmatine，THP)为研究对象，采用HPLC手性固定相模式建立血浆中THB对映体的定量方法，研究THB对映体在SD大鼠体内的药动学特征；利用MDCK—MDRl单层细胞模型研究THB单一对映体的跨膜转运机制；采用“cocktail”探针法评价THP对映体对大鼠肝细胞色素P450酶亚型活性的影响；利用UPLC．Q—TOF／MS和LC．MS／MS分析技术，对大鼠灌胃给药四氢巴马汀单一对映体后尿液中THP对映体代谢产物及体内代谢途径进行推测。获得此类四氢原小檗碱同类物在动物体内的手性药代动力学特征，可能产生的代谢产物以及对映体对CYP450同工酶

3、活性的影响，具体内容包括：1．四氢小檗碱在大鼠血浆中的手性药代动力学研究建立血浆中THB对映体的HPLC手性固定相定量方法，血浆样品采用SupelcleanLC一18固相萃取柱提取，色谱柱为ChiralAD柱(250mmx4．6ITInl，5岬)；流动相组成为甲醇．乙醇(80：20，v／v)，流速：0．4mL／min，检测波长230nnl，柱温：25℃。经方法学验证，d-THB在0．010～2．5}_tg／mL范围内线性关系良好，／-THB在0．010"-'5．0pg／mL范围内线性关系良好。THB对映体的萃取回收率均大于70％，日内、日间RSD均小于15％。应用以上方法测定了SD人鼠灌

4、胃给药50mg／l(g和静注给药10mg／kg消旋体THB后的对映体血浆浓度，获得相应的药动学参数，灌胃组d-THB和／-THB的Cm双，AUCo．。。分别为1．09pg／mL，1．91嵋·h／mL和2．01“g／mL，4．15峙‘h／mL，均存在显著性差异(P<0．05)；静注组d-THB和I-THB的AUCo．。分别为1．95pg·h／mL和2．79¨g·h／mL，存在显著性差异(P<0．05)。结果表明，THB在大鼠血浆中药代动力学具有立体选择性特征。2．THB对映体在MDCK-MDRI细胞中的跨膜转运研究利用MDCK．MDRl单层细胞模型研究THB单一对映体的双向转运特性，采用高

5、效液相色谱法测定THB单一对映体的含量，计算其表观渗透系数(尸卵。)。结果显示，／-THB从MDCK．MDRl细胞模型A面到B面的表观渗透系数尸狮tA--,B，为第二军医大学硕士学位论文1．27x10～nm／s，而从B面到A面的表观渗透系数Papp(B_+A)为5．65x10～nm／s，外排率为4．45：d-THB从A面到B面的表观渗透系数‰tA_+B，为1．27x10～nm／s，而从B面到A面的表观渗透系数PappcB-+A，为4．67x10～nm／s，外排率为3．68。由此说明，I-THB和d-THB在MDCK．MDRl单层细胞模型中的转运可能涉及到主动转运机制。3．“Cocktai

6、l"探针药物法评价THP对映体对大鼠肝细胞色素P450酶亚型活性的影响建立同时测定大鼠血浆中5种CYP450探针药物，即美托洛尔(CYP2D6)、咖啡因(CYPlA2)、氨苯砜(CYP3A4)、氯唑沙宗(CYP2E1)和甲苯磺丁脲(CYP2C9)的HPLC．MS方法，并采用“cocktail"探针药物法快速评价THP对映体对上述同工酶的影响。将SD大鼠随机分成4组，每组6只，分别给药d-THP、l-THP、dl-THP，空白对照组给予生理盐水。给药7天后静注给予5种探针药物混合溶液。采集不同时间点的血样检测各探针药物浓度，通过药动学参数来评价各组CYP450酶系的活性。结果表明，给予d-

7、THP组的美托洛尔和咖啡因代谢减慢，半衰期tl／2延长；给予I-THP组的咖啡因代谢减慢，半衰期延长，氨苯砜和甲苯磺丁脲代谢加快，半衰期缩短；给予dl-THP组的咖啡因代谢减慢，半衰期延长，氨苯砜、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲代谢均加快，半衰期缩短。由此推测，d-THP对CYP2D6和CYPlA2有抑制作用，I-THP对CYPlA2有抑制作用，对CYP3A4和CYP2C9有诱导作用，消旋体THP对上述同工酶的影响作用受小型和，-型的综合影响