右旋雷贝拉唑钠微生物限度方法验证报告

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1、右旋雷贝拉呼钠微生物限度检查法验证报告1＞供试品批号：规格：原料药来源：江苏奥赛康药业验证起止时间：2、培养基胰酪月东大豆琼脂培养基批号：140304沙式葡萄糖琼脂培养基批号：131230胰酪陈大豆肉汤培养基批号：130426均为符合药典规定的干燥培养基。由中国药品生物制品检定所提供。上述培养基的灵敏度检查和无菌性检查均符合药典规定。3、仪器电子天平：KF3102江苏凯丰集团有限公司细菌培养箱：GNP-9160上海精密实验设备有限公司真菌培养箱：BK6160美国赛默飞世尔科技公司无菌隔离器：HTY-SZ1806B杭州泰林生物技术设备有限公司4、试剂与稀释液PH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲

2、液，青岛蓝雁绿检牛物技术有限公司金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]第3代大肠埃希菌[CMCC(B)44102]第3代铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]第5代枯草芽沦杆菌[CMCC(B)63501]第5代白色念珠菌[CMCC(F)98001]第5代黑曲霉[CMCC(F)98003]第5代上述菌种均由江苏省药品检验所提供。6、验证依据中国药典2015年版四部（通则1105-1106）非无菌产品微牛物限度检查7、实验操作7.1菌液制备7.1.1分别接种金黄色葡萄球菌、枯草芽范杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至10ml的胰酪腺大豆肉汤培养基中，置30〜35°C培养18〜24小时，分别取

3、上述培养物lml加9mlpH7.0的无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液，10倍递增稀释制成适宜浓度的菌悬液。7.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中，置20〜25°C培养24〜48小时,取上述培养物lml加9mlpH7.0的无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液，10倍递增稀释制成适宜浓度的的菌悬液。7.1.3接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，置20〜25°C培养5〜7天，使大量的砲子形成。加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液，将抱子洗脫并过滤抱子悬液至无菌试管内，取lml原液加9ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的

4、无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉泡子悬液。7.2供试液制备称取供试品加pH7.0无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液至100ml,充分振摇混匀,制得1:10的供试液，取50ml均分成五份(每份10ml)o7.3验证试验一细菌、霉菌及酵母菌计数验证7.3.1试验组需氧菌：取上述均分好的三份供试液，分别加入0.1ml金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孑包杆菌的适宜浓度菌液，混匀，使每lml均分供试液含菌量不大于lOOcfu；用适量pH7.0无菌氯化钠■蛋白腺缓冲液润湿滤膜后，分别取含菌供试液lml,通过直径约为50mm,JL径不大于0.45um的薄膜过滤。每膜用500mlpH7.0无菌氯化钠

5、■蛋白腺缓冲液进行冲洗，冲洗后取岀滤膜。菌面朝上贴于胰酪陈大豆琼脂培养基上，于30〜35°C培养不超过3天。霉菌和酵母菌：另取上述剩余的两份供试液，分别加入0.1ml白色念珠菌、黑曲霉的适宜浓度菌液，混匀，使每lml供试液含菌量不大于lOOcfu,用适量pH7.0无菌氯化钠•蛋白腺缓冲液润湿滤膜后，分别取含菌供试液lml,通过直径约为50mm,孔径不大于0.45um的薄膜过滤。每膜用500mlpH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液进行冲洗，冲洗后取出滤膜。菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20〜25°C培养不超过5天。7.3.2供试品对照组用适量pH7.0氯化钠•蛋白月东缓冲液润湿滤膜后

6、，取供试液1ml,通过直径约为50mm,孔径不大于0.45um的薄膜过滤。用每膜500mlpH7.0氯化钠■蛋白腺缓冲液分3次冲洗，冲洗后取出滤膜。将滤膜分别贴于胰酪月东大豆琼脂培养基上，于30〜35°C培养不超过3天，和沙氏葡萄糖琼脂培养基上于20〜25°C培养不超过5天。7.3.3菌液组取50mlpH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液，均分成五份（每份10ml）,分别接种0.1ml金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的适宜浓度菌液，混匀，使每lml缓冲液含菌量不大于lOOcfu；分别取含菌缓冲液lml置无菌平皿，向接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌的

7、平皿内注入15〜20ml温度不超过45°C的胰酪月东大豆琼脂培养基，混匀，凝固,于30〜35°C培养不超过3天，观察结果。向接种白色念珠菌与黑曲霉的平皿内注入15〜20ml温度不超过45°C的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，于20〜25°C培养不超过5天。7.3.4阴性对照组分别吸取1.0ml稀释剂置2个无菌平皿，并向内注入15〜20ml温度不超过45°C的胰酪腺大豆琼脂培养基，混匀，凝固，于30〜35°C培养不超过3