慢病毒介导的shrna干扰沉默mcl-1基因对淋巴瘤细胞系生长的影响

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1、郑州大学硕士学位论文慢病毒介导的shRNA干扰沉默Mcl--1基因对淋巴瘤细胞系生长的影响姓名：岳光星申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：张明智201204摘要慢病毒介导的shRNA干扰沉默Mcl．1基因对淋巴瘤细胞系生长的影响研究生导师岳光星张明智郑少I'1大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052摘要：j￡：t；，月京恶性淋巴瘤是最常见的恶性肿瘤之一，它是由临床病理类型不同的一组异质性肿瘤疾病构成的。NK／T细胞淋巴瘤是恶性淋巴瘤的一种亚型，与其它类型的淋巴瘤显著不同，其高发于亚洲和南非，组织学特征为血管破坏、肿瘤坏死和凋亡。虽然大部分病人早期肿瘤局限于局部，但

2、NK／T细胞淋巴瘤是一组高度侵袭性、对化疗耐药及预后较差的肿瘤。目前许多传统的治疗方法会带来许多毒副反应，从而影响治疗的效果和患者的生活质量。因此，寻找一种新的治疗NK厂r细胞淋巴瘤的方法是势在必行的。最近几年许多新的治疗方法包括基因治疗得到了充分的发展。慢病毒介导的RNA干扰是基因治疗的一种新方法。病毒介导的RNA干扰相对于非病毒介导的RNA干扰有许多优势，比如干扰效率高、宿主范围广以及治疗基因表达时间长等。表达ShRNA的病毒载体包括逆转录病毒、腺病毒和近些年发现的慢病毒。其中在许多实体瘤的研究中发现慢病毒对人体无明显毒副作用，安全性较高。据报道许多病毒载体在淋巴瘤

3、细胞中的感染率非常低，因此对于淋巴瘤来说寻找一个合适的病毒载体是进行基因治疗研究的第一步。我们之前的研究已经证实了慢病毒是一种理想的载体，可以高效的转导外源性的基因进入淋巴瘤细胞。摘要Mcl．1基因是Bcl．2家族的一员，它能够通过抑制细胞凋亡从而促进肿瘤的发生发展。目前已经证实许多类型肿瘤细胞的生存和发展都是依赖于Mcl．1基因的，在血液系统肿瘤和实体瘤中发现Mcl．1基因的高表达能够促进肿瘤的形成，包括白血病和肝癌等。在转基因小鼠中Mcl．1高表达能够显著增加B细胞淋巴瘤的发生率，在许多肿瘤类型中降低Mcl．1的表达能够诱导肿瘤细胞的凋亡。研究发现Mcl．1的高表达

4、可以引起某些肿瘤的耐药性。因此Mcl．1基因有望成为肿瘤治疗的新靶标。目的研究慢病毒介导的髓细胞白血病基因(Mcl．1)短发夹RNA干扰(shRNA干扰)对NK／T淋巴瘤细胞系SNK．6增殖和凋亡的影响。方法设计以Mcl．1为靶点的短发夹RNA(shRNA)并构建携带此shRNA的慢病毒载体，转染淋巴瘤细胞系SNK-6，荧光定量PCR(qPCR)及Westernblot方法检测病毒感染后Mcl一1基因mRNA及蛋白表达变化，四甲基偶氮唑盐法(MTr法)和流式细胞仪分析细胞增殖和凋亡变化的情况。结果成功构建Mcl一1一shRNA慢病毒表达载体，并可有效感染淋巴瘤细胞株SN

5、K．6，感染后SNK-6细胞Mcl．1基因的mRNA水平及蛋白水平表达明显下调，MTr法检测显示慢病毒介导的Mcl．1基因shRNA干扰与对照组相比可明显抑制SNK-6细胞增殖(31．6％±3．3％vs5．8％±2．7％，P<0．001)，流式细胞仪测定感染后细胞凋亡明显高于对照组(28．9％±2．1％vs5．3％±1．5％，P<0．001)。结论1、成功构建Mcl．1．shRNA慢病毒表达载体，并可有效感染淋巴瘤细胞株SNK．6。2、慢病毒介导的Mcl．1基因RNA干扰技术可特异性阻断SNK-6细胞Mcl．1基因的表达，抑制细胞的增殖并促进细胞的凋亡。关键词淋巴瘤；髓

6、细胞白血病基因．1：短发夹RNA：凋亡；慢病毒载体llAbstraclTheeffectsoflentivirus．mediatedshRNAinterferencetargetingMcl-1ongrowthofNK／T-celilymphomaPostgraduate：YueGuangxingsupervisor：ZhangMingzhiDepartmentofOncology，TheFirstAffiliatedHospitialofZhengzhouUniversityZhengzhou450052AbstractLymphomaisthemostcommonh

7、ematologicmalignancyandcomprisesaheterogeneousgroupofmalignanciesconsistingofdifferentclinicpathologicentities．NK／T—celllymphomaisadistinctsubtypeoflymphomarelativelycommoninAsiaandSouthAmerica．Histologicalfeaturesofthisdiseaseareangiocentricity，angiodestruction，andmassiv