慢病毒介导HGF-ShRNA干扰肝细胞生长因子表达对肝星状细胞凋亡的影响.pdf

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1、·2976·广东医学2014年10月第35卷第19期GuangdongMedicalJournalOct．2014，Vo1．35，No．19慢病毒介导HGF—ShRNA干扰肝细胞生长因子表达对肝星状细胞凋亡的影响球张君红，姜海行，覃山羽，陶霖，韦柳萍，黄小丽广西医科大学第一附属医院老年消化内科，消化内科(530021)【摘要】目的观察慢病毒介导的HGF—ShRNA部分干扰大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)及肝星状细胞(HSCs)来源的肝细胞生长因子(HGF)表达，对BMSCs与HSCs共培养体系中HSCs凋亡的影响，探讨两种细胞来源的H

2、GF对HSCs凋亡的促进作用。方法应用6孔培养板，建立BMSCs及HSCs双层细胞共培养体系，实验分4组：(1)HSCs单独培养组：HSCs单独培养；(2)BMSCs+HSCs共培养组：BMSCs与HSCs共培养；(3)BMSCs转染共培养组：使用慢病毒介导的HGF—ShRNA转染BMSCs后与HSCs共培养；(4)HSCs转染共培养组：使用慢病毒介导的HGF—ShRNA转染HSCs后与BMSCs共培养。分别于培养24、48、72h后，采用AnnexinV—FITC／PI双染法检测各组HSCs凋亡率，Westernblot、荧光定量PC

3、R分别检测各组DR5、Caspase一8蛋白及mRNA的表达。结果BMSCs4-HSCs共培养组HSCs的凋亡率明显高于HSCs单独培养组和BMSCs转染共培养组，且呈时间依赖性(P<0．01)，而与HSCs转染共培养组比较差异无统计学意义(P>0．05)；BMSCs+HSCs共培养组HSCs中DR5、Caspase一8蛋白及mRNA表达量均明显高于HSCs单独培养组及BMSCs转染共培养组(P<0．01)，而与HSCs转染共培养组比较差异无统计学意义(P>0．05)。结论BMSCs旁分泌HGF通过上调HSCs的DR5、Caspase一

4、8的表达促进HSCs的凋亡。HSCs自分泌的HGF在共培养体系中促进其凋亡的作用甚少。【关键词】骨髓间充质干细胞；肝星状细胞；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；肝细胞生长因子；死亡受体5Efectsofinterferingtheexpressionofhepaticgrowthfactormediatedbylentivirusonapoptosisofhepaticstellatecells．ZHANGJun—hong，JIANGHai～xing，QINShah一，TAOLin，WEILiu—ping，HUANGXiao—li．Dep—

5、artmentofElderlyGastroenterology，theFimtAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheefectsoflentiviralmediatedHGF—ShRNAinterfereinprimaryhepaticstellatecells(HSCs)andbonemalTowmesenchym~stemcells(BMSCs)ontheexpressio

6、nofhepatocytegrowthfactor(HGF)andtheapoptosisofHSCs．ToexploretherolesofBMSCsandHSCsderivedHGFintheapoptosisofHSCs．MethodsBMSCsandHSCswereusedtoestablishtheupperandlowerco—culturesystem．Experimentwasdividedintofourgroups：HSCsblankgroup(HSCsculturedalone)，co—culturedgroup(

7、BMSCsco—cuhuredwithHSCs)，BMSCstransfeetionco—culturegroup(BMSCstransfeetedwithlenti—HGF—ShRNAandco—cuhuredwithHSCs)，andHSCstransfectionco—culturegroup(HSCstransfectedwithlenti—HGF—ShRNAandco—culturedwithBMSCs)．After24，48and72hcultured，apoptosisofHSCswasdeterminedbyAnnexi

8、n—V—FITC／PI；whiletheexpressionofDR5andCaspase一8proteinandmRNAinHSCswasdeterminedbyWesternblotandFQ—PCR，