何首乌生熟异用作用机理的研究

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1、云南中医学院硕士学位论文何首乌熟异用作用机理的研究姓名：赵紫伟申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：赵荣华201205摘要何首乌生熟异用作用机理的研究研究生：赵紫伟导师：赵荣华教授朱培芳实验师摘要何首乌为蓼科植物PolygonummultiflorumThunb．的干燥块根。何首乌的使用生熟有别。唐代及以前多见使用其生品，生品味苦涩，色黄白，有润肠通便、解毒消肿的功效，用于治疗老年肠燥便秘，风疹瘰疬；制何首乌味甘，有乌须发，强筋骨，补肾益精功效，用于治疗须发早白，血虚乏力，高血脂和腰膝酸软。在何首乌历代文献中，制何首乌

2、的临床运用多于生品。何首乌质量控制评价以单一有效化学成分为评判指标已经显现出片面与不足，同时，何首乌药用化学成分研究与其药理药效研究的阐述一直是相对独立的两方面，时常出现化学成分不能有效揭示药效作用规律，同样，药理药效的研究结果又难于体现在化学成分物质群变化中，这样就给物质决定功效，功效反衬物质变化的相关性诠释带来困难。因此，通过建立在中药色谱指纹图谱技术上的中药谱．效学关联分析方法，进而探讨何首乌生品与制品化学成分和药效作用间的关系，为中药质量控制体系提供理论依据和数据支持。研究方法及结果如下：1、建立何首乌不同炮制品

3、HPLC指纹图谱。根据收集到的国内12批样品药材，标定何首乌生品甲醇提取液指纹图谱共有模式峰32个，22号、25号、26号、27号所组成的四指峰是图谱中的共有特征峰，其峰形尖锐，分离度好，峰对称性高，峰信息丰富。何首乌水提液共有模式峰相对醇提液指纹图谱峰较少。在炮制过程中共有峰变化存在明显区别，生品与炮制lh、2h间的成分变化差异较大，3h、4h后各成分变化趋于稳定，成分改变无显著性差异，提示何首乌炮制工艺中，炮制时间控制在4h范围内为宜。实何酋乌生熟异用作用机理研究验发现生品与炮制品间存在部分原有色谱峰的消失，如9号、

4、12号、21号和24号峰；同时有部分新成分色谱峰的出现。2、何首乌不同炮制品的药效实验。泻下功效是何首乌生药材的主要药用功效，依据小鼠粪便色点法与炭墨推进实验可定性和定量反映何首乌生品泻下药用功效，发现2h、3h制品无明显止泻作用，而4h制品有明显止泻作用(P<0．05)，与生理盐水组比较存在显著差异，有统计学意义。在近年文献中报道，何首乌中的结合型葸醌是药材发挥泻下作用的物质基础，其泻下作用机制为结合葸醌刺激肠管壁蠕动，促进小鼠排便。本文通过家兔离体肠管实验证实，何首乌生品组、1h制品组、2h制品组对家兔离体肠管肌收缩

5、张力与生理盐水组比较有有显著性差异(P<0．001)，3h制品组后无显著性差异，工艺上以4h为最佳。通过人体胚肺二倍体细胞(HEL)抗衰老实验，验证何首乌制品的补益功效。何首乌与1h制品何首乌的细胞衰亡效率同正常细胞衰亡效率相仿，三者问的SOD活力无显著性差异(P>0．05)，而2h、3h、4h制品何首乌能提高SOD活力的效用，其中4h制品何首乌SOD活力最高，与空白组细胞比较有显著性差异(P<0．001)，说明4h制品何首乌有延缓人胚肺细胞衰亡的作用，提高HEL细胞中SOD活性。‘3、何首乌不同炮制品水提液HPLC指纹

6、图谱与生熟异用功效的关联性分析借助化学计量学计算机模拟评价系统分析方法，研究何首乌生品与不同炮制时间制品水提液HPLC指纹图谱与生熟异用功效的关联性。通过灰色关联对系统各要素做出分析，若因素间在发展过程中相对变化趋于一致，则认为因素间关联性大；相反，则关联性小。依据关联度大小，确定成分对“致泻作用”贡献的大小顺序是2号，7号和30号峰与药材发挥泻下药效关联密切；各成分峰对“抗衰老作用”贡献大小顺序是11号、14号和8号峰。4、含何首乌的中药复方用药规律分析从药典方、经方和要方中搜集相关记载何首乌用药复方，建立何首乌复方数

7、据库，运用频数分析、聚类分析和关联规则方法对复方数据挖掘。按何首乌药材功效类别得到分析结果如下：2摘要①在治疗补肝肾、益精血22方中，涉及主要药物20种，共使用频次121次，分滋阴药、补血收涩药和补益药3个类别，关联规则分析有4个药对，18个药组；②在治疗补肾填精8方中，涉及主要药物17种，共使用频次64次，分补肾利湿药、补虚药2个类别关联规则分析有5个药组；③在治疗泻肝风18方中，使用频次157次，分补虚药、保肝益气药、解表药和祛风胜湿药4个类别，关联分析有药对1个，药组关联23个；④治疗清热解毒16方中，涉及主要药物

8、16种，共使用频次92次，分泻下清热药、解表药、清热泻火药和清热解表药4个类别，关联规则分析有2个药对，21个药组；⑤在治疗肠燥便秘4方中，涉及主要药物14种，共使用频次16次，分滋阴药、清热利泻药和泻下药3个类别，关联规则分析有13个药对，6个药组；⑥在治疗疟疾5方中，涉及主要药物14种，共使用频次30次，分理气补