茯苓乙酸乙酯提取物抗肿瘤活性成分研究

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1、湖北中医药大学硕士学位论文茯苓乙酸乙酯提取物抗肿瘤活性成分研究姓名：邬兰申请学位级别：硕士专业：药物分析学指导教师：杨敏20120529摘要茯苓PoriaCOCOS(Schw．)wblf又称茯菟、茯灵、松薯等，为多孔菌科(Polyporaceae)真菌茯苓的干燥菌核．我国资源丰富，主产于湖北、湖南、安徽等省，其中以湖北罗田九资河所产茯苓品质优良．茯苓为历史悠久的传统中药，其性平，味甘、淡，具有利水渗湿、健脾和胃、宁心安神的作用；临床用于小便不利，水肿，脾胃气虚，食少便溏，体倦乏力以及心神不宁，惊悸，失眠等症．其

2、主要化学成分为多糖、三萜、脂肪酸、甾醇等。现代药理学研究表明，茯苓具有抗肿瘤、调节免疫功能、抗炎、抗衰老等药理作用．本实验室前期研究表明，茯苓乙酸乙酯提取物具有抗肿瘤生物活性。本论文通过学科交叉的研究方法，对茯苓乙酸乙酯提取物抗肿瘤活性成分进行了研究．采用色谱法对茯苓乙酸乙酯提取物进行了较系统的分离纯化，从中分离得到4个单体成分，分别为茯苓酸(Pachymieacid，B1)、去氢茯苓酸(Dehydropachymieacid，B2)、薯蓣皂苷(Dioscin，H1)、三角叶薯蓣皂苷(Deltonin，H2)．

3、其中，化合物薯蓣皂苷(Dioscin，H1)和三角叶薯蓣皂苷(Deltonin，1-12)为首次从茯苓中发现．采用M丌法检测上述分离的化合物对肝癌(HepG2)、官颈癌(Caski)、肺癌(H460)、乳腺癌(MDA．MB．231)细胞株体外增殖的影响，并筛选出敏感的肿瘤细胞株．研究结果表明，化合物H1和H2对肝癌细胞株HepG2、官颈癌细胞株Caski、肺癌细胞株H460、乳腺癌细胞株MDA．MB一231均有明显的抑制增殖作用，并呈剂量依赖性和时间依赖性；其中药物高浓度对肝癌细胞株HepG2、肺癌细胞株H46

4、0、乳腺癌细胞株MDA．MB．23l处理48h和72h抑制率均高达90％以上，尤其是对乳腺癌细胞株MDA．MB．231更为明显．比较半数抑制浓度可知，经化合物H1和H2处理乳腺癌细胞(MDA．MB．231)24h、48h、72h的IC50分别为6．171ag／ml、1．821ag／ml、1．451ag／ml和1．73I_tg／ml、0．515Itg／ml、0．171I_tg／ml。通过Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化，初步探讨了化合物H1和H2的抗肿瘤机制．研究结果表明，乳腺癌细胞(MDA．M

5、B．231)经化合物Hl和H2(2．1599／m1)处理24h后，Hoechst33258染色呈现明显的细胞凋亡形态特征，表明化合物Hl和H2具有诱导MDA-MB．231细胞凋亡作用。综合分析本论文的研究结果，对于诠释茯苓的抗肿瘤药效物质基础具有重要意义。主题词：茯苓：化学成分：抗肿瘤：结构鉴定：细胞凋亡¨StudyontheantitumoractivecompositionsofEtOAcextractiORofPeriaCOCOSSpeciaIity：pharmaceuticalanalysiSAurth

6、or：WuLanTutor：YangMingandLiuYanwenAbstraotPeriaCOCOSiSthearidSCleroteofPoriaCOCOS(Schw．)WolfwhichisakindofmycetesbelongingtoPolyporaceae．PoriaCOCOScanalsobecalledwithFutuorSongshu．Ourcountry7SrecourceiSrich，itismainlyproducedinttubei，Hunan，Anhui，etc．PeriaCOC

7、OSwhichcomefromLuotiantownofHubeiprovinceiSgoodatqua1ity．PeriaCOCOSiSatraditionalChinesemedicineforalonghiStory，itsnatureandtastingforsweetand1ight．PoriaCOCOScanexcretedampness，beusedasdiuretictoa1leviatedropsy，invigoratespleenandcalmthenerves．Themainlychemi

8、ca1compositionofPeriaCOCOSarepOlysaccharides，triterpenoids，fatacid，daucosterol，Enzyme．ModernpharmacologyStudieshaveshownthatPeriaCOCOShastheflowingbio—activity：anti-tumor，regulateimmuDcfunction，