tnf-α基因单核苷酸多态性及血清水平与退变性腰椎侧凸的相关性研究

《tnf-α基因单核苷酸多态性及血清水平与退变性腰椎侧凸的相关性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文TNF--α基因单核苷酸多态性及血清水平与退变性腰椎侧凸的相关性研究姓名：安志辉申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：丁文元201203中文摘要TNF．Cc基因单核苷酸多态性及血清水平与退变性腰椎侧凸的相关性研究摘要目的：研究探讨肿瘤坏死因子．a(Tumornecrosisfactor．alphaTNF．0【)基因单核苷酸多态性和血清中TNF．0【水平与退变性腰椎侧凸(DegenerativelumbarscoliosisDLS)的相关性，从基因及分子水平研究退变性腰椎侧凸的病因，为临床分析退变性腰椎侧凸的病因及预防提供依据。退变性腰椎侧凸是指在骨骼

2、发育成熟以后，在腰椎退变的基础上发生的脊柱畸形，一般冠状位Cobb角大于10度，但不超过40度，多发生在50岁以上的中老年人。退变性腰椎侧凸是一种立体的、复杂的旋转畸形，随着研究的进展，如生物力学，脊柱解剖的进一步认识，逐步发现退变性腰椎侧凸不仅存在冠状位上椎体的失平衡，还存在矢状位上的椎体平衡的丢失和旋转，多种畸形作用的结果导致腰背疼痛及下肢的神经症状。目前，我国逐步进入老龄化社会，该病发病率逐年升高，是影响老年人的生活质量的重要疾病。该病的发病原因复杂，具体机制尚不清楚，有研究证实了n师．O【与腰椎退变存在相关性，TNF．仅通过激活炎性介质，介导炎性反应，引起腰椎退变，但

3、在TNF．a基因水平及其血清中含量与退变性腰椎侧凸是否存在相关性，国内外很少有报道。本研究通过聚合酶链式反应．限制性片段长度多态性方法(polymerasechainreactionrestrictionfragmentpolymorphismsassay，PCR—RFLP)及酶联免疫吸附测定方法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)检测n盯．0t基因启动子转录起始位点上游第308位点单核苷酸多态性及其血清含量，探讨此位点的多态性以及血清中TNF．0【蛋白含量与北方汉族人群退变性腰椎侧凸的关系。方法：选取2009年10月至2011年12月

4、于河北医科大学第三医院脊柱外科门诊及病房收治的60例退变性腰椎侧凸患者作为研究对象，均行腰椎正侧位X线及腰椎MRI检查，选取同时期于该院进行健康体检者60例作为正常对照组，两组研究对象均系无血缘关系的北方汉族个体，在性别、年龄、体重指数与病例组相匹配。收集两组患者的外周新鲜血液，用小量全血基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA，应用聚合酶链反应(PCR)技中文摘要术对两组研究对象DNA标本TNF．Ot基因启动子区特异性片段进行扩增，再应用限制性内切酶长度多态性(I强LP)技术对扩增的特异性片段用NcoI进行酶切，产物用2％琼脂糖凝胶电泳的方法进行检测，分析其基因型及等位基因频率

5、的分布。用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)，对两组研究对象血清n师．a蛋白水平进行检测。利用AdobePhotoshop6．0软件，测量病例组MⅪ图像中顶椎间盘及其上下椎间盘内髓核与脑脊液T2加权像的相对信号强度，同时测量病例组正位X线片上的Cobb角。应用SPSS13．0统计软件对数据进行统计分析，性别、体重指数、血清TNF．0【含量比较采用t检验或方差分析。年龄、基因型及等位基因频率等计数资料比较采用#或Fisher精确概率法检验，血清TNF。0t含量与椎间盘退变程度及Cobb角相关分析采用Linearcorrelate分析。结果：两组研究对象的年龄、性别、体重指数比较

6、差异无统计学意义(P>0．05)，表明在年龄、性别、体重指数方面匹配。TNF．Q．308所在片段经PCR扩增后目的片段的长度为107bp，酶切后有3种基因型，G／G基因型(87bp、20bp2条带)，G／A基因型(107bp、87bp、20bp3条带)，～A基因型(107bpl条带)。两组研究对象各基因型频率分布符合Hardy．Weinberg遗传平衡定律，研究对象具有代表性。TNF．a308多态性位点G／G、G／A和A√A基因型频率在病例组为分别为70．0％、26．7％和3．3％，对照组为86．7％、11．7％和1．7％，两组基因型频率差异无统计学意义(P>O．05)。G／

7、G基因型频率与t乍G／G基因型频率(G／A、A／A)及等位基因G、A频率在病例组为分别为70．O％、30．O％和83．3％、16．7％，对照组为86．7％、13．3％．；f1192．5％、7．5％，两组比较差异均有统计学意义(P