GBT5009.27-1996-食品中苯并芘的测定方法.pdf

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1、GB/T5009.27—1996中华人民共和国国家标准食品中苯并（a）芘的测定方法Methodfordeterminationofbenzo(a)pyreneinfoodsGB/T5009.27—19961主题内容与适用范围本标准规定了食品中苯并（a）芘的测定方法。本标准适用于食品中苯并（a）芘的测定。样品量为50g，点样量为1g时，方法最低检出浓度为1ng/g。2原理样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液-液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并（a）芘，因苯并（a）芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后

2、有苯并（a）芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。3试剂3．1苯：重蒸馏。3．2环己烷（或石油醚，弗程30～60℃）：重蒸馏或经氧化铝柱处理无荧光。3．3二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。3．4无水乙醇：重蒸馏。3．5乙醇（95%）。3．6氢氧化钾。3．7丙酮：重蒸馏。3．8石油醚（60～90℃）：重蒸。3．9甲酸（88%～90%）。3．10无水硫酸钠：120℃烤2h以上。3．11咖啡因甲酸溶液（150g/L）：称咖啡因（医用或试剂用）15g，溶于适量甲酸中，再稀释至100mL。3．12甲酸（40%）。

3、3．13硫酸钠溶液（20g/L）。3．14脱脂棉：用二氯甲烷回流4h以上。3．15展开剂：乙醇（95%）-二氯甲烷（2：1）。3．16硅镁型吸附剂：将60～100目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次（每次用水量为吸附剂质量的4倍）于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗（甲醇与吸附剂量克数相等），抽滤干后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在130℃干燥5h后，装瓶贮存于干燥器内，临用前每100g加5g水减活，混匀并平衡4h以上，最好放置过夜。3．17层析用氧化铝（中性）：120℃活化4h。3．18乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成30cm×4cm的条状

4、，逐条放入盛有乙酰化混合液（180mL笨、130mL乙酸酐、0.1mL硫酸）的500mL烧杯中，使滤纸充分地接触溶液，保持溶液温度在21℃以上，时时搅拌，反应6h，再放置过夜。取出滤纸条，在通风橱内吹干，再放入无水乙醇中浸泡4h，取出后中华人民共和国卫生部1996—06—19批准1996—09—01实施GB/T5009.27—1996放在垫有滤纸的干净白瓷盘上，在室温内风干压平备用，一次可处理滤纸15～18条。3．19苯并（a）芘标准溶液：精密称取10.0mg苯并（a）芘，用苯溶解后移入100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液

5、每毫升相当于苯并（a）芘100μg。放置冰箱中保存。3．20苯并（a）芘标准使用液：吸取1.00mL苯并（a）芘标准溶液置于10mL容量瓶中，用苯稀释至刻度，同法依次用苯稀释，最后配成每毫升相当于1.0及0.1μg苯并（a）芘两种标准使用液，放置冰箱中保存。4仪器4．1脂肪提取器。4．2层析柱：10～15mm，长350mm，上端有内径25mm，长80～100mm内径漏斗，下端具有活塞。4．3层析缸（筒）。4．4K-D全玻璃浓缩器。4．5紫外光灯：带有波长为365nm或254nm的滤光片。4．6回流皂化装置：锥形瓶磨口处连接冷凝管。

6、4．7组织捣碎机。4．8振荡器：装有自制木架，每次可摇6个分液漏斗。4．9微量注射器：25μL、50μL。4．10荧光分光光度计。5分析步骤5．1荧光分光光度法5．1．1样品提取5．1．1．1粮食或水分少的食品：称取40.0～60.0g粉碎过筛的样品，装入滤纸筒内，用70mL环己烷润湿样品，接收瓶内装6～8g氢氧化钾、100mL乙醇（95%）及60～80mL环己烷，然后将脂肪提取器接好，于90℃水浴上回流提取6～8h，将皂化液趁热倒入500mL分液漏斗中，并将滤纸筒中的环己烷也从支管中倒入分液漏斗，用50mL乙醇（95%）分二次洗

7、接收瓶，将洗液合并于分液漏斗。加入100mL水，振摇提取3min，静置分层（约需20min），下层液放入第二分液漏斗，再用70mL环己烷振摇提取一次，待分层后弃去下层液，将环己烷层合并于第一分液漏斗中，并用6～8mL环己烷淋洗第二分液漏斗，洗液合并。用水洗涤合并后的环己烷提取液三次，每次100mL，三次水洗涤合并于原来的第二分液漏斗中，用环己烷提取二次，每次30mL振摇0.5min，分层后弃去水层液，收集环己烷液并入第一分液漏斗中，于50～60℃水浴上，减压浓缩至40mL，加适量无水硫酸钠脱水。5．1．1．2油脂5．1．1．2．1

8、植物油：称取20.0～25.0g的混匀油样，用100mL环己烷分次洗入250mL分液漏斗中，以环己烷饱和过的二甲基甲酰胺提取三次，每次40mL，振摇1min，合并二甲基甲酰胺提取液，用40mL经二甲基甲酰胺民和过的环己烷提取一次，弃去环己烷液层。二