超声微泡促进matrilin2+shrna转染对肝卵圆细胞增殖影响的研究

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1、5．于肝切除术后第4、8、12、16、20天处死D、E、F三组大鼠获取肝脏组织，每个时间点处死5只大鼠。切取一部分立即快速冰冻切片，并于荧光显微镜下观察EGFP表达；另一部分用10％中性甲醛固定，用于制作病理切片，观察各组各时间点HOC形态及增殖情况，SP免疫组织化学技术检测卵圆细胞标志OV-6表达；最后切取一部分组织保存于液氮，备实时定量PCR方法检测各组各时间点肝脏组织中matrilin．2mRNA的表达。6．运用SPSSl8．0软件包对matrilin．2mRNA表达量与HOC计数进行spea咖aIl线性相关分析。【结

2、果】1．建立体外留置性门静脉置管模型的20只大鼠中，2只大鼠因术中操作致出血死亡，术后15h出现1只大鼠死亡，解剖发现死亡原因为导管从血管中脱出导致出血，其余17只大鼠全部存活，总存活率为85％。2．EGFP在肝脏的表达情况：A、B、C三组大鼠转染后24h发现少量荧光于肝脏表达，第3天达到高峰，A组3天后逐渐减少，至第7天荧光基本消失；B、C两组转染后且第7天仍持续表达，此后减少，第11天仅见微量荧光表达：转染后第3天及第7天B、C两组转染效果较A组均明显增强(p<0．01)，转染后第3天C组较B组转染效果略有增强(p<0．

3、05)。3．肝卵圆细胞增殖模型大鼠一般情况：D组，即单纯卵圆细胞增殖模型组大鼠术后活动减少、精神差，随后出现毛松无光泽、尿黄、腹水，3只大鼠死亡，死亡率10％，鼠尾静脉(E)和门静脉(F)质粒注射干扰组被毛松乱更明显、尿黄，腹水增多，死亡率分别为13．3％和20％。4．肝卵圆细胞增殖模型大鼠形态学与组织学变化：D组大鼠肝脏代偿性增大、充血、肝缘圆钝，表面及切面可见散在圆形点状病灶、不凸出肝表面，部分见出血点。镜下肝细胞水肿、肝索结构紊乱，汇管区增生反应，可见圆形或卵圆形、胞浆少、核质比高的HOC，术后20天结构完全恢复，恢复

4、后肝索排列整齐。E、F两组和D组相比，肝脏出血点明显，点状病灶增多，镜下肝细胞水肿严重，肝索结构紊乱，汇管区增生反应较模型组少，术后20天恢复后肝索结构较D组紊乱。25．免疫组织化学检测OV-6表达：D组术后4天于汇管区可见OV-6表达阳性的细胞，第8天阳性细胞数明显增多，第12天阳性细胞数达到高峰，开始离开汇管区想小叶中央迁移，部分OV-6阳性细胞己开始分化，第16天OV-6阳性细胞数明显减少，第20天仅见极少数OV6阳性细胞。E、F两干扰组与D组相比，第8天及第12天OV-6阳性细胞数减少(p

5、明显差异。6．实时定量PCR检测matrilin．2表达：D组第12天matI．ili_n．2mIⅢA表达达到高峰，此后减少，第20天基本恢复正常生理水平。E、F两干扰组第8天、第12天表达较D组少(p<0．05)，第20天较正常生理水平略高。7．将HOC计数与matrilin．2mRNA表达量行线性相关分析：D组相关系数r=0．79，有统计学意义(P<0．05)；E、F组相关系数分别为r=0．76、F0．74(p

6、方法简单、术后死亡率低、成功率高等优点。2．超声联合微泡造影剂促进目的基因的体内转染率，尤其联合门静脉置管模型增强效果更明显，有望成为一种有效、安全的肝脏靶向性基因转运方法。，一3．成功建立大鼠HOC增殖模型，且matrilin．2mIⅢA表达与HOC增殖数目呈正相关关系。4．超声微泡介导转染matrilin．2shRNA质粒有效下调了大鼠ma吲in．2表达，matrilin．2下调后HOC增殖数目减少，肝索结构恢复差，表明matrilin．2可能参与调控HOC增殖介导的肝再生。阐明肝内ECM成分在维持肝脏正常结构和细胞增殖

7、、分化、迁移方面具有重要作用。【关键词】肝卵圆细胞，母系蛋白．2，细胞外基质，超声微泡，IⅢA干扰3studyontheEffectofMatriIin一2shRNATransfectionEnhancedbyUltrasound．mediatedMicrobubbleonOvalCeHProKferation【ObjectiVe】Abstract1．T0establishanewmethodoftheratponalVeinca肌ulamodel，andexploretheroleofultraSoundmicrobubb

8、lecomr2Lst-agemenhancedgeneexpressioninmeliVer，tofindanidealmethodofgenen_ansf．ectionta唱etedliVerinViVo．2．Throu曲theratmodelofhepaticoValcellsprol