食品中喹诺酮类抗菌药的分析方法比较研究 (1)

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1、浙江工商大学硕士学位论文食品中喹诺酮类抗菌药的分析方法比较研究摘要喹诺酮类(quinolones，QNs)药物是～类抗菌作用强，抗菌谱广的人工合成抗菌药。随着QNs在家禽类动物中的大量使用，很多地方出现滥用该类药物的情况，使得ONs在动物性食品中残留的现象普遍存在。QNs在人体内累积后能产生毒副作用，而低浓度的QNs残留能导致病原微生物产生耐药性，从而危害人类健康。本研究建立了三种食品中喹诺酮类药物的分析方法，并对方法进行比较，旨在建立切实可行的分析食品中多种QNs的方法，从而更好的监控食品中QNs的残留，确

2、保食品的安全性。本实验首先对样品的提取液、提取方式和净化方法进行研究。选择了五种提取溶剂、三种提取方式和两种净化方法对喹诺酮的提取及净化效果进行比较。结果表明柠檬酸．磷酸盐缓冲液(Mcllvaine)的提取率高，超声提取的方式效果好，固相萃取(SPE)的净化方法更有效。SPE的方法优化结果：选择Varian～Boudelutplexa固相萃取柱为净化柱，采用3mL甲醇、3mL纯水、3mLMcllvaine缓冲液活化，lmL5％甲醇水溶液淋洗，6mL甲醇洗脱目标物质。本文建立了气相色谱(GC．FID)矛H气质联

3、用(GC—MS)分析方法的操作条件。酸性喹诺酮经衍生化后用气相色谱检测，GC．FID检测出萘啶酸浙江工商人学硕士学位论文(NAL)和氟甲喹(FLU)，检出限是9．09／％g／mL和11．54∥g／mL，定量限是30．30／tg／mL$[138．36#g／mL。GC-MS检测出奥索利酸(oxo)、NAL矛IFLU，检出限是23．08／tg／mL、1．03乒tg／mL和1．18肛g／mE，定量限是79．92／％g／mL、3．42／tg／mL和3．95／比g／mL。GC-FID和GC—MS分析速度快、定性准确，但样

4、品分析前需经过衍生化，样品处理相对复杂。本研究分析了三种酸性QNs，但这两种方法适用范围窄，且灵敏度低。因此该方法不适于检测残留在食品中微量的QNs类药物。高效液相色谱(HPLC．FLD)方法LI',GC．FID和GC．MS方法在分析QNs类药物方面具有一定的优势。本文建立了同时检测食品中13种喹诺酮类药物的HPLC．FLD分析方法，并对色谱柱、流动相体系、检测波长和其他色谱相关参数进行了选择优化。经方法学验证：QNs的线性范围是2．00～200．00ng／mL(其中达氟沙星在1．00"-'100．00ng／

5、mL，恩诺沙星和莫西沙星在4．006--800．00ng／mL，OXO、NAL和FLU在2．00"-'400．00ng／mL)；ONs在各自的线性范围内具有良好的线性关系，相关系数R2范围在0．9987"-一0．9999之间。最低检出限(LOD)在0．008"-"1．112／tg／kg，定量限(LOQ)在0．027"-3．706卢tg／kg。在空白样品中添加三个浓度水平的QNs标准溶液，13种QNs的回收率在72．76％'--102．79％之间，日内精密度在0．61％'--9．99％之间，日间精密度在3．40

6、％～6．09％。该方法操作简便，灵敏度高，可同时分析多组分QNs的残留。超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC．MS／MS)L匕液相色谱具有更快的分析速度，能分析更多种QNs。本文建立了同时检测食品中22种喹诺酮类药物的UPLC．MS／MS分析方法。该方法对色谱柱、流动相体系、色谱和质Ⅱ浙江工商大学硕上学位论文谱相关参数进行了选择优化。通过空白样品基质溶液加标定量，有效地降低了基质干扰的影响，回收率和重现性良好，QNs在其线性范围内相关系数为0．9851～0．9997之间，具有良好的线性关系。LOQ在0．008

7、／zg／kg"-"0．339／zg／kg，回收率在63．1％～94．6％之间，相对标准偏差在0．86％"13．12％之间。该方法灵敏度高，定性定量准确，分析速度快，可以对食品中多组分QNs的残留进行分析。通过对GC．FID、GC／MS、HPLC．FLD和UPLC．MS／MS方法的比较得出，GC．FID和GC．MS方法分析QNs的种类少，检出限高，灵敏度相对较低，不适合分析残留在食品中微量的QNs类药物。UPLC．MS／MS的分析速度快，分离效率高，即使在液相色谱不能同时分析多种QNs的情况下，质谱检测器的多离

8、子反应监控技术(MRM)也能解决这一问题，而且还能同时分析更多种QNs。本研究分析了22种QNs，但仍可能开发出更多种QNs的同时检测方法。但HPLC．FLD分析QNs的价格比UPLC．MS／MS便宜，而且液相色谱比质谱检测器的稳定性高。HPLC．FLD和UPLC．MS／MS的灵敏度和准确性高，操作简便，定量限远低于我国农业部和欧盟规定的动物性食品中QNs的最低残留限量，因此两种方法都适合分析食品中