豹皮樟总黄酮血清对tgfβ1干预的大鼠肝星状细胞的作用与部分机制

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1、安徽医科大学硕士学位论文豹皮樟总黄酮血清对TGF-β1干预的大鼠肝星状细胞的作用及部分机制研究生孙玲导师李俊教授（安徽医科大学药学院，合肥，230032）中文摘要肝纤维化是肝脏受到慢性损伤时，针对损伤因子所产生的一个自我愈合过程，同时又是所有慢性肝病进展成肝硬化的共同病理基础与必经阶段，是影响慢性肝病预后的重要环节。目前认为肝纤维化可以逆转，常规的病程是肝纤维化、肝硬化直至恶变为肝癌。我国是肝病高发国家，以慢性乙型、丙型病毒性肝炎最为常见，严重影响着我国人民的生命质量和劳动力水平，在当前尚无良好抗病毒方法的情况下，阻止或逆转

2、肝纤维化进程已成为慢性肝病相当重要的治疗对策。肝纤维化的病理学基础为细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）合成增加，降解减少，导致胶原过度沉积。而肝脏内主要胶原合成细胞——肝星状细胞（hepaticstellatecells，HSC）的激活、增殖则是肝纤维化发生的中心环节。慢性肝损伤后，HSC在某些激动因子作用下，形态与功能表型发生较大改变，其中又以细胞活化增殖、表达α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）及ECM生成增多为最显著的活化特征。HSC的活化是由静止HSC向肌

3、成纤维细胞（myofibroblaster，MFB）转化的过程，依赖于众多细胞因子的网络调节中，目前认为转化生长因子-β（TGF-β）是肝纤维化形成的关键因子，结缔组织生长因子（CTGF）作为TGF-β的下游效应介质，主要介导TGF-β的促纤维化作用，TGF-β可通过多种信号传导途径诱导CTGF的表达以发挥促纤维化的作用。随着肝纤维化发生机制的逐渐阐明，使肝纤维化的预防，治疗，甚至逆转成2安徽医科大学硕士学位论文为可能。但迄今为止，现代医学尚无良好治疗方法，而中医中药对肝纤维化的良好预防和治疗效果及低毒性反应等特点目前已引起

4、国内外学者的广泛关注。近年来，大量实验与临床研究证实运用活血化瘀为主的方法治疗肝纤维化均取得了较好疗效。豹皮樟，又名老鹰茶，系樟科木姜子属毛豹皮樟的叶，是我国南方各民族民间长期饮用的一种植物代用茶，具有清凉止渴、解毒消肿、明目健胃等功效。老鹰茶中含有多种有效成分，经我院天然药物化学室研究，确定了豹皮樟的有效部位为总黄酮。目前关于老鹰茶的实验研究较少，我院前期研究表明豹皮樟总黄酮具有显著的抗氧化和抗炎免疫作用，对酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化均具有较好的防治作用。中医中药抗肝纤维化研究业已取得可喜成果，但中药作

5、用机制及有效物质的研究一直是中药新药开发与中药研究的热点和难点。中药复方尤其是较粗的制剂含有较多的杂质，如直接加入体外反应体系，其酸碱度、渗透压、鞣质和无机盐等非特异性理化因素将严重干扰实验，导致实验的假阳性或假阴性结果。1984年血清药理学方法在日本提出后，对准确再现中药复方在体内发挥作用的“有效成份”提供了一种有力的工具。为进一步阐明豹皮樟总黄酮影响肝纤维化的作用机制，本实验采用血清药理学方法，在细胞及分子水平上探讨了豹皮樟总黄酮对肝星状细胞的作用。主要内容如下：1.豹皮樟总黄酮血清对TGF-β1干预的大鼠肝星状细胞活化

6、增值及α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响健康成年SD大鼠随机分为4组：正常组、TFLC低（1g/kg）、中（2g/kg）、高（4g/kg）剂量组，给药4天后取大鼠血清作用于TGF-β1干预的HSC，MTT法检测HSC的增值、半定量RT-PCR法检测HSC中α-SMA、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果含药血清各剂量组能明显抑制HSC-T6的增值和α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达。提示，TFLC血清可抑制HSC的活化增值及胶3安徽医科大学硕士学位论文原分泌。2.豹皮樟总黄酮血清对TGF-β1干预的大鼠肝

7、星状细胞TβR1/CTGF及Smad信号通路的影响健康成年SD大鼠随机分为4组：正常组、TFLC低（1g/kg）、中（2g/kg）、高（4g/kg）剂量组，给药4天后取大鼠血清作用于TGF-β1干预的HSC，半定量RT-PCR法检测HSC中TβR1、CTGF、Smad2、Smad3及Smad7mRNA的表达。Western-blot方法检测HSC中TGF-β、CTGF蛋白的表达。结果表明，各剂量组TFLC血清均能明显下调TβR1、CTGF、Smad2及Smad3mRNA的表达，上调Smad7mRNA的表达，且明显降低TGF-

8、β、CTGF蛋白的表达。TFLC血清还可抑制HSC的活化增值及胶原分泌，其机制可能与阻断HSC中的Smads信号传导通路进而下调CTGF的表达有关。关键词：肝纤维化；豹皮樟总黄酮；肝星状细胞；α-SMA；Ⅰ型胶原；Ⅲ型胶原；CTGF；Smad3；Smad74安徽医科大学硕士学位论文Effe