中国北方地区肝硬化与肝癌患者hbv基因型与亚型分析

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1、郑州大学2仪旧届硕士研究生学位论文摘要中国北方地区肝硬化及肝癌患者HBV基因型及亚型分析硕士研究生罗晓雅导师李建生教授郑州大学第一附属医院消化内科河南郑州450052摘要背景与目的乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染是引起慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要原因之一，全世界己有近3.5一4亿人成为慢性HBV携带者。我国是HBV感染的中高流行区，2006年的血清学调查结果表明我国一般人群HBsAg携带率为7.18%，有近3000万慢性乙型肝炎患者。目前，依据全基因序列异质性差异)8%或S

2、区基因序列差异)4%，将HBV分为A一HS种基因型，其中A基因型又分为两种亚型:Aa型(a代表Asia)和Ae型(e代表European);B基因型分为Ba型(a代表Asia)和Bj型(j代表JaPan)两种亚型;C基因型分为Cl、C2两个亚型。近年来的研究表明HBV基因型与传播方式、疾病进展、预后以及临床抗病毒疗效等均有一定的相关性。为了解中国北方地区HBV基因型及亚型在终末期肝病病人中的分布情况，本研究采用基因型及亚型特异引物的巢式聚合酶链反应检测了101例肝硬化患者和178例原发性肝癌患者的H

3、BV基因型及基因亚型分布，并结合临床资料分析HBV基因亚型与终末期肝病的相关性，以进一步明确不同HBV基因型致肝脏损害的差异。材料与方法1.选取2007一2008年北方地区HBVDNA阳性的肝硬化和原发性肝细胞癌住院患者共279例。其中包括155例新鲜肝脏组织标本和124例血清标本。郑州大学2009届硕士研究生学位论文摘要2.核酸提取酚一氯仿抽提法分别提取血清和组织中的HBV一DNA。3.行巢式聚合酶链反应对HBV一DNA进行分型。4.使用2%的琼脂糖凝胶进行电泳。以2000DL分子量标准的Mark

4、er，作为分子量对照。5.凝胶成像，并通过产物片段的大小来判断基因型(部分样本进行前S/S区以及X区的基因测序，以验证确定基因型)。6.数据分析采用SPSS13.O统计软件进行统计，两均数比较使用t检验，率的比较采用卡方检验，多个样本的比较采用非参数检验。P<0.05时认为有统计学意义。结果1.将PC尺产物在2%琼脂糖中进行电泳，根据PCR产物片段大小能清晰直观地辨别出HBV的基因型及亚型。随机选取部分样本进行前S/s区以及X区的基因测序，测序分型结果与PCR基因分型结果的符合率为100%，证实了此

5、方法的特异性和准确性。2.PCR结果显示，在101例肝硬化患者中，分型结果为Ba亚型的1例(0.99%)，CZ亚型94例(93.07%)，Ba、CZ混合型6例(5.94%)。在178例原发性肝癌患者中，分型结果为Ba亚型的6例(3.37%)，CZ亚型159例(89.33%)，Ba、CZ混合型13例(7.30%)。两组患者中均未检测到其他基因型。统计结果表明，两组的基因型均以CZ型为主，Ba、CZ亚型在肝硬化和肝癌患者中的分布无显著性差异(P>0.05)。3.肝硬化与肝癌患者的男女构成比有显著性差异(

6、P<0.05)，男性在肝癌患者中所占比例大于在肝硬化患者中所占比例。各基因亚型感染患者中男性均多于女性，CZ型肝硬化和肝癌患者的男女构成比有显著性差异(P<0.05)。肝硬化与肝癌患者的年龄分布无显著差异(P>0.05)。经Kruskal一Walis检验，各种基因亚型在肝硬化患者和肝癌患者中的年龄分布无差别(P>0.05)。4.各种基因型HBeAg阳性率在肝硬化患者和肝癌患者中均无显著性差异(P>0.05)，但肝癌患者中HBeAg阳性率明显低于肝硬化患者(P<0.05)。5.肝硬化和肝癌患者的TBI

7、L水平有显著性差异(P<0.05)，但不同基因亚型肝郑州大学20()9届硕士研究生学位论文摘要硬化患者、肝癌患者中TBIL的水平无显著性差异(P>0.05)。肝硬化和肝癌患者的ALT水平无显著性差异(P>0.05)，各种基因亚型在肝硬化患者或肝癌患者中的ALT水平无显著性差异(P>0.05)6.通过比较49对癌组织、癌旁组织HBV基因亚型的分布，发现有3对配对标本的基因型不同，其中癌组织均为CZ型，癌旁组织均为Ba、CZ混合型。结论1.本研究结果显示肝硬化和肝癌组病例均以C基因型感染为主，B型次之。

8、基因亚型分析结果进一步表明，所有C型标本均为CZ亚型，所有B型标本均为Ba亚型，而BC混合型标本都为Ba亚型和CZ亚型混合感染。2.肝硬化和肝癌患者中各基因型及亚型的分布无显著性差异，而肝硬化及肝癌患者中的C基因型分布则显著高于慢性乙型肝炎患者。表明C基因型的HBV感染所导致的肝病病情较重，进展较快，进一步证实HBV基因型与疾病的进展预后具有相关性。3.B、C基因型肝硬化和肝癌组患者男、女构成比均无明显差异。提示不同基因型男性和女性HBV感染者发生肝硬化以及肝癌的可能