egcg对angⅱ引起内皮细胞骨架重排的逆转作用机制

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1、目录⋯1111

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6、111IY1775录⋯⋯一⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯一1中文摘要⋯⋯·····⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯·一一⋯⋯·2英文摘要⋯⋯······⋯⋯⋯······⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯·4前言⋯⋯···⋯··⋯··⋯一···⋯⋯⋯⋯·一··⋯⋯6刖舌⋯⋯一“⋯。⋯’“⋯。””⋯⋯⋯。“一一⋯⋯6实验材料⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一···⋯⋯⋯⋯一⋯⋯一8实验方法⋯⋯·····⋯⋯⋯······⋯⋯⋯···⋯······⋯13实验结果·⋯⋯·⋯···⋯⋯⋯·······⋯·········⋯

7、⋯··19讨论·⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯··⋯···⋯·····25小结··⋯······································⋯⋯·28参考文献··⋯⋯⋯·····⋯⋯···⋯··⋯⋯⋯⋯·⋯⋯·29附录：缩写词表···················⋯··⋯⋯⋯⋯········34文献综述··········⋯⋯⋯·······························36致谢⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯····⋯⋯52个人简历⋯·⋯·⋯······⋯·····⋯⋯·····⋯

8、···⋯·····53学位论文原创性声明和授权使用说明········⋯⋯············54中文摘要研究背景及目的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对内皮细胞具有保护作用。血管紧张素II(AngII)通过若干细胞内信号传递系统的活化，引起内皮细胞损害，在内皮屏障功能不良中起重要作用。外源性刺激主要是通过引起细胞骨架重排导致内皮屏障功能不良。特异性信号分子如p38MAPK、JNKl／2、ERKl／2等参与了细胞骨架重排的调控。但不同外源性刺激作用于内皮细胞后，细胞内信号分子和信号通路如何作用，调控细胞骨架重排，

9、并最终引发内皮屏障功能不良的分子机制尚未完全阐明。本研究主要探讨AngII在导致内皮屏障功能不良中，诱导内皮细胞纤维状肌动蛋白(F—actin)骨架重排的分子机制，以及EGCG逆转作用的机制。实验方法和结果1．探讨AngII诱导内皮细胞骨架F—actin重排的分子机制。(1)利用Rhodamine—Phalloidine染色观察人脐静脉内皮细胞(HUVECs)经AngII处理后F—actin的变化。结果发现AngII引起F—actin骨架重排。表现为正常组细胞的F—actin主要富集于细胞膜的周边，分布均匀；AngII组

10、细胞周边的F—actin消失，胞浆中出现密集的应力纤维，细胞间隙形成，且呈明显的浓度、时间依赖性。(2)采用Westernblot检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶家族中p38MAPK，JNKl／2，和ERKl／2的磷酸化水平。结果显示AngII上调了p38MAPK和JNKl／2的磷酸化水平，但对ERKl／2无明显影响。另外，肌动蛋白结合蛋白HSP27的磷酸化水平亦上调。(3)经p38MAPK和JNKl／2相应的特异性抑制剂预处理后，AngII再刺激。westernblot检测蛋白磷酸化水平变化；Rhodamine—Phall

11、oidine染色观察细胞骨架F—actin的变化。结果显示：p38MAPK抑制剂SB203580有效抑制了AngII所引起的p38MAPK和HSP27的磷酸化水平增加，同时阻断了应力纤维及细胞间隙的形成；而JNKl／2抑制剂SP600125有效抑制了AngII所引起的JNKl／2磷酸化水平增加，但HSP27磷酸化水平未发生改变，且仍可见细胞内应力纤维和细胞间隙。2．探讨EGCG是否逆转AngII对内皮细胞所引起的改变及其分子机制。EGCG预处理后的内皮细胞经AngII刺激，westernblot检测蛋白磷酸化水平的改变，

12、Rhodamine—Pha儿oidine染色观察细胞骨架F—actin的变化。结果表明，EGCG抑制AngII诱导的p38MAPK和HSP27的磷酸化水平增加，减少细胞内应力纤维形成和细胞问隙扩大，且呈浓度依赖性。2结论AngII诱导内皮细胞骨架F—actin重排，即细胞周边的F—actin消失，细胞内应力纤维形成，进而细胞间隙增加，这一过程依赖于p38MAPK／HSP27信号通路的激活。EGCG则通过抑制这一信号通路逆转AngII引起的细胞骨架重排，从而保护内皮细胞。这一机制的阐明为研究绿茶提取物EGCG的作用提供了重

13、要的新思路，提示EGCG是内皮屏障功能不良和内皮损伤的有效保护制剂。关键词EGCG，血管紧张素II，F—actin，丝裂原活化蛋白激酶，热休克蛋白27英文摘要TheReverseEffectofEGCGonAngⅡ一inducedCytoskeletonReorganizationinEndothelialCells