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时间:2019-02-01
《干细胞因子及其受体在儿童再生障碍性贫血发病机制中的作用研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、华中科技大学同济医学院附属协和医院博七研究生学位论文缩略语英文全称SCFstemcellfactorAASAACAA英文缩略词索引(abbreViations)aplasticanemiaseriousaplastieanemiachronicaplastlcanemia中文全称干细胞因子再生障碍性贫血’重型再生障碍性贫血慢性再生障碍性贫血mSCFmembrane-boundstemcellfactor膜结合型干细胞因子sSCF+solublestemcellfactor可溶型干细胞因子BMMNCbonemarrowmononuelearcell骨髓单个核细胞interleukin-3白细胞(
2、问)介素-3STATssignaltransducerandactivator信号转导子和转录激活子transcriptionRT-PCRreversetranscriptase-polymerase反转录一聚合酶链反应chainreactionSSCPsingtestrandconformationpotymorphism单链构象多态性SABCStrepta“din-biotincomplex5链霉亲和素生物素复合物ELISAenzymelinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验DEPCdiethylpyroearbonate焦碳酸乙二酯EDTAethylenediam
3、inetetraacetateacid乙二胺四乙酸PBSHRPPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液horseradishperoxidase辣根过氧化酶华中科技大学同济医学院附属协和医院博士研究生学位论文干细胞因子及其受体在儿童再生障碍性贫血发病机制中的作用研究摘要研究背景与目的:再生障碍性贫血(aplasticancmia,AA,简称再障)是多种因素引起的骨髓造血功能衰竭,是严重危害儿童身体健康的常见血液病。其可能的发病机制包括:原始造血干细胞缺陷(种子学说)、免疫介导的造血抑制(虫子学说)、骨髓微环境障碍(土壤学说)。自从1904年Chauffard首次提出再障的名称
4、后,人们便对其病因和其发病机制进行了不断的探索。许多学者应用体外造血细胞集落形成技术证明再障时骨髓各类型造血干,祖细胞均有明显的减少或缺如,患者造血功能衰竭的程度与骨髓中造血细胞的数量成正比,其CD34+细胞数和集落形成能力均明显低于正常对照组,提示造血干细胞缺乏导致造血功能衰竭可能是再障发病的主要因素。然而,应用免疫抑制剂如抗胸腺细胞或淋巴细胞球蛋白(A1rG或ALG)以及环孢霉素A(CSA)治疗时,其疗效为50%-80%,由此表明即使重型再生障碍性贫血(seriousaplasticanemia,SAA),其体内仍有少量造血干细胞残留。近年来随着免疫学、细胞生物学及分子生物学的迅速发展,人
5、们对再障的发病机制有了更进一步的认识。认为多因素引起的造血微环境的改变可能也是其发病的重要机制之一.新近研究表明,骨髓造血受~些因子及其受体的调控,这些因子与其受体相互结合,通过不同的信号转导通路启动或关闭一系列的基因而实现对造血细胞增殖、分化、凋亡的调控。其中最受瞩目的是干细胞因子(Stemcellfactor,SCF)及其相应受体c-kit(CDll7)。造血微环境是造血细胞赖以生长、分化、成熟的场所,它的和谐与一些细胞因子的调控密切相关,干细胞因子(SCF)及其受体(C-kit)是作用于最早期的造血干细胞,调控着干细胞的分化及成熟。因此,推测干细胞因子及其受体可能与儿童再障的发病机制有关
6、。但目前为止,国内外尚未见到这方面的研究报道。鉴于此,我们设计了本研究课题,共分三部分,即通过ELISA酶联免疫双抗体夹心法检测再障患儿、正常儿童、正常足月新生儿脐华中科技大学同济医学院附属协和医院博士研究生学位论文血血浆中可溶性SCF及可溶性c-kit受体的水平;应用免疫细胞化学和核酸分子原位杂交技术及RT-PCR方法检测再生障碍性贫血患儿骨髓单个核细胞SCF及c.妣受体蛋白及细胞内mRNA的表达情况:并通过RT-PCR-SSCP及基因测序技术测定其c-kit受体基因结构序列有无改变。从血浆、蛋白、分子表达、基因水平进一步探讨SCF及其受体c-kit在再生障碍性贫血患儿发病机制中的作用。密切
7、结合I临床需要,为揭示儿童再生障碍性贫血发病机制和指导临床诊治提供有价值的实验证据。一、血浆可溶性SCF及e-kit受体水平与儿童再障的发病机制1.材料和方法:本研究以再障患儿、正常足月新生儿脐血及正常儿童血浆作为实验对象,采用ELISA酶联免疫双抗体夹心法检测其可溶性SCF及可溶性c-kit受体的水平,可溶性c-kit(DIAcL∞姬,F黜~NCE)批内变异系数《%,批间变异系数<7.9%。检测
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