【硕士论文】裂蹄木层孔菌发酵工艺及其发酵菌丝药效研究.pdf

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1、浙江大学硕上学位论文摘要裂蹄木层孔菌(Phellinuslinteus／)是一种药用真菌，属于针层孔菌属。中国古籍药典中有记载，裂蹄木层孔菌具有促进血液循环和增强解毒等功效。随着现代医学和生物技术的不断发展，许多学者对裂蹄木层孔菌具有出众的抑制肿瘤以及提高机体免疫的能力进行了深入并且广泛的研究，特别是从裂蹄木层孔菌中寻找新的抗肿瘤化合物的研究，已经成为药用真菌研究的一个热点。最近的研究揭示裂蹄木层孔菌和现有化疗药物共同作用时，具有增强化疗药物药效的作用，这引起了研究人员更广泛的关注。裂蹄木层孔菌野生资源非常匮乏，不但产量小而且采摘困难，不仅如此，由于环境污染等问题，使得这种珍稀药用真

2、菌的研究和大规模的利用面对着非常严竣的资源问题。我们使用液体深层发酵的技术解决了这一问题，得到最优培养基组成为：葡萄糖5％，牛肉膏1．5％，豆饼粉o．75％，硫酸镁0．06％，磷酸氢二钾0．06％。最优的发酵条件为：发酵时间，9天；发酵温度，27．5℃，初始pH，6．o；摇床转速，175rpm；接种量，10％。用最优培养基发酵验证发酵得到菌丝干重为30．891+0．8859／L，胞外多糖产量为2．651+0．0759／L，分别是优化前的1．5倍和2．5倍。实验证实裂蹄木层孔菌胞外多糖具有抗肿瘤的能力，当0．75mg／ml的裂蹄木层孔菌胞外多糖作用72h后，人胃癌肿瘤细胞系SGC．79

3、01的肿瘤细胞抑制率可以达到34．5％。裂蹄木层孔菌胞外多糖可以增敏阿霉素诱导的肿瘤细胞的凋亡，在阿霉素亚毒性浓度的时候可以显著提高肿瘤抑制效率，o．1ug／ml阿霉素作用72h后，肿瘤细胞抑制率为43．89％，而加入0．25mg／ml的裂蹄木层孔菌胞外多糖协同作用72h后，肿瘤细胞的抑制率就可以达到66．13％。动物实验结果表明，250mg／kg的裂蹄木层孔菌醇提物单独作用时可以显著减小胃癌肿瘤，而它在不同浓度下(125、250和500mg／kg)协同30mg／kg环磷酰胺共同作用，均可以显著减小肿瘤，值得我们注意的是，裂蹄木层孔菌醇提物对化疗药物环磷酰胺有明显的减毒和增效作用。关

4、键词：裂蹄木层孔菌发酵胞外多糖醇提物抗肿瘤化疗药物协同作用浙江大学硕}学位论文AbstractPhellinusLinteusisamedicalmushroomwhichbelongstoPhellinus．PhellinusLinteushasbeendescribedinChineseherbalmedicineliteraturetobeeffectiveonadiversityofdiseases，includingimprovingbloodcirculationandenhancingdetoxication．Withmodernmedicineandthecontin

5、uousdevelopmentofhasbeeninvestigatedforitsbiotechnology，PhellinusLinteusextensivelyextraordinarycapacityofsuppressingcancerandenhancingbodyimmunity,whichmakesPhellinusLinteusaprospectivecandidatefordevelopingnovelanti—cancerfromnaturalresources．RecentstudieshaverevealedthatthePhellinuscompounds

6、Linteuscouldimprovetheefficacyofchemotherapydrugs，whenitworkedtogetherwiththecurrentchemotherapydrugs．Thisphenomenonhaveattractedmoreattentionsfromtheresearchers．ThewildresourcesofPhellinusLinteusareverysca／'ceanddifficulttopick．Itsyieldisverysmall．Besides，duetotheproblemsoftheenvironmentalpoll

7、utionandSOon，theresearchesoftheraremedicinalfungusandthelarge-scaleusehavetofaceatoograveproblemofresources．Wesolvetheproblembyuseoftheliquidsubmergedfermentationtechnology,andgettheoptimalnutritionalrequirements：5％ofGlucose，1．5％o