米非司酮对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡影响

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1、四川大学硕士学位论文米非司酮对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响姓名：王雪梅申请学位级别：硕士专业：妇产科指导教师：徐克惠20070501声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。申请人指导教师壶需☆四川大学临床医学硕士专业学

2、位论文米非司酮对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影晌硕士研究生：王雪梅导师：徐克惠教授摘要目的本实验通过研究不同剂量米非司酮对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响，探讨米菲司酮与卵泡发育的关系及临床应用米非司酮治疗子宫内膜异位症等激素依赖性疾病的可能机制，为米非司酮的临床应用提供理论依据。方法选取4—5周龄未成年SD雌性大鼠，腹腔注射60单位的孕马血清促性腺激素(PMSG)以刺激卵泡发育，48小时后处死大鼠取卵巢，机械法分离颗粒细胞，体外培养24小时贴壁后更换新鲜培养基，并分别加入101mol／L(低剂量组)、10～ol／L(中剂量组)、101mol／L(高剂量组)的米非司酮继续培养

3、24小时，对照组为空白组。通过电镜下超微结构观察对颗粒细胞进行鉴定，运用流式细胞术结合荧光染色(Hoechst33342)了解不同浓度米非司酮对颗粒细胞形态学及生物学的影响，免疫细胞化学法观察不同浓度米非司酮下颗粒细胞中Fas的表达，化学发光法测定不同浓度米非司酮处理颗粒细胞后的雌二醇和孕酮水平。用One-wayANOVA和LSD法检验的统计学方法进行处理组与对照组及两两组间数据比较分析，方差不齐则选用调整方差齐性的dunnett检验进行两两比较，检验水准a-o．05，双侧。所有实验数据采用SPSSll．5四川大学临床医学硕士专业学位论文统计软件包进行处理。结果1．原代培养大鼠

4、卵巢颗粒细胞，活细胞数量可达90％以上，体外培养24小时后，颗粒细胞贴壁生长，胞质富含颗粒，细胞间出现纤维性连接。透射电镜下可看到所收集细胞中颗粒细胞达80％～85％，其特征性的超微结构：胞质内出现管状嵴线粒体，滑面内质网(SER)丰富，出现电子密度较高的类脂滴。2．流式细胞术检测结果显示，随米非司酮浓度增加，颗粒细胞凋亡率增加，低剂量组(6．7％4-0．73％)与对照组(7．5％4-0．8896)间差异无统计学意义(P>O．05)，中剂量组(9．53％±0．78％)、高剂量组(13％4-1．75％)与对照组间差异有统计学意义(P

5、5)。进一步结合荧光显微镜观察细胞凋亡情况，细胞核致密浓染的凋亡细胞数量随米非司酮剂量增加而增多，细胞凋亡率低剂量组(4．18％4-0．9096)与对照组(1．49±2．2096)间无统计学差异(P>O．05)，中剂量组(6．63％4-1．48％)、高剂量组(15．45％4-3．89％)与对照组间有统计学差异(P

6、)与对照组(O．19444-0．0818)之间差异有统计学意义(P<0．01)，各组间均有差异(P<0．05)。4．离体颗粒细胞孕酮的水平随米非司酮浓度增加而降低。低剂量组(2．274-0．55pg／m1)、中剂量组(O．56±0．16pg／m1)、高剂量组(O．184-0．08pg／m1)与对照组(7．67±1．67pg／m1)之问有差异(P<0．01)，2四川大学临床医学硕士专业学位论文各处理组间差异有统计学意义(PO．05)。结论1．米非司酮可诱导颗粒细胞发生凋亡，离体颗粒细胞凋亡率随米非司酮剂量增加而增高

7、，可能是米非司酮抑制卵泡发育和激素水平，治疗子宫内膜异位症等激素依赖性疾病的机制之一．2．米非司酮可能通过调节颗粒细胞表面凋亡因子Fas蛋白的表达面诱导颗粒细胞凋亡，从而影响孕酮的分泌，可能是米非司酮抑制卵泡发育的机制之一．3．离体颗粒细胞雌二醇水平没有受到明显抑制，可能提示米非司酮对卵巢功能没有直接的影响。关键词米非司酮卵巢颗粒细胞凋亡Fas雌二醇孕酮四川大学临床医学硕士专业学位论文Effectofmifepristoneontheapoptosisofculturedratsovaria