《生物工程专业分析》实验指导书

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1、化工学院《生物工程专业分析》实验指导书适用专业：生物工程贵州大学二OO七年12月本实验是针对于生物工程专业分析课程开设的，主要内容是通过实验使学生更好的掌握专业分析课堂授课的内容，更直观的了解各类生物工程样品的分析方法和理论原理。在实验中要求学生熟练掌握分析的基本实验操作技能和方法；对学生进行实际样品的分析测定操作训练，使学生掌握获得正确分析数据的基本过程和基木方法，切实培养他们分析问题和解决问题的能力。要求学牛在实验中应用课堂讲授的理论知识，勤于动手、动脑，实验中认真观察记录现象及结果，做好实验报告。具体试

2、验项冃有游离氨基酸测定、蛋口质测定、粗脂肪测定、还原糖测定、总酸总酯测定、铜的测定、酶活力测定、阿贝折射仪的使用等。其中蛋片质测定为综合性实验。1、实验一：游离氨基酸测定42、实验二：白酒中总酸的测定63、实验三：白酒中总脂的测定84、实验四：粗脂肪含量测定105、实验五:糖类的测定136、实验六:铜含量测定167、实验七：波美计、密度计及阿贝折射仪的使用188、实验八:酶活力测定229、实验九：蛋白质含量测定2510、附件一：实验报告基本内容耍求2811、附件二：实验报告格式2912、附件三：实验注意事项3

3、1实验一:实验学时：3学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的1、常握甲醛法测泄游离氨基酸的测定原理和方法。二、实验内容使用甲醛滴定法测定游离氨基酸三、实验原理氨基酸屮的NH?基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定。但可以用甲醛法测量。在pH'P性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的a■氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚瞅批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH*基上的H：每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮R-NH3+^H++R-NH2R-NH2+2HCHO->R-N(

4、CH2H)2滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%o如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L,即滴定后最终浓度为6%-9%。四、实验组织运行要求集屮授课形式五、实验条件1.试剂⑴40%屮性甲醛溶液：在50mL36%〜37%甲醛屮加入5滴5

5、g/L酚瞅乙醇溶液，然后用0.2mol/LNaOH溶液滴泄到微红(使用前需重新中和)(2)酚瞅指示剂：5g/L酚豔的50%乙醇溶液(3)0.0lmol/L氢氧化钠标准溶液(4)10%(体积分数)乙酸溶液2.玻璃仪器⑴50ml容量瓶(2)20ml移液管⑶碱式滴定管(4)50ml量杯⑸250ml三角瓶六、实验步骤⑴样品处理称取试样0.2g(准确至lmg),置入研钵中，力口5ml10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。(2)样品滴定在三角瓶中加入2mL样品滤

6、液，加水4mL,3滴酚駄指示剂，摇匀后用0.01mol/LNaOH标准溶液滴定到微红色。然后加入2mL屮性甲醛溶液，摇匀，放置片刻，再用0.01mol/LNaOH标准溶液滴定回到微红色中点，记下甲醛加入后样品消耗NaOH标准溶液的体积。同样，取6mL水按以上操作做空白实验。七、计算a■氨基氮含量(%)=(V-Vo)xcxO.O14x(l/2)x50x(l/m)xl00式中：V—加甲醛后样品消耗NaOH标准溶液体积(mL)V0—加甲醛后空白消耗NaOH标准溶液体积(mL)c—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)

7、0.014—消耗lml1mol/LNaOH标准溶液相当于氮的质M(g)2—吸取样品滤液的体积(mL)50—样品稀释液的总体积(mL)m—称取试样质量(g)八、讨论⑴甲醛法屮除氨态氮外别的氮也能起反应(如钱盐、酰胺等)，故误差较大。另外由于各种氨基酸的等电点不同，故确定一个合适的滴定终点较为困难。(2)脯氨酸与甲醛作用后，生成不稳定化合物，致使滴定结果偏低，酪氨酸含有酚基，滴定时要消耗一定的碱，可使滴定结果偏高。溶液中若有氨存在也可与甲醛反应，使结果偏高。九、思考题若溶液屮有钱存在测定结果会偏高还是偏低十、实验

8、报告实验预习、实验记录和实验报告具体要求详见附件一和附件二。实验二:白酒中总酸含量测定实验学时：2学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的1、常握酸碱滴是法测是白酒中总酸度的原理及方法二、实验内容白酒中的总酸用标准碱溶液直接滴定，根据所消耗的碱量推算出白酒中总酸的含量。三、实验原理白洒屮的总酸以屮和法直接测定，根据所消耗的碱液量计算岀白酒屮总酸的含量(白洒中总酸以乙酸计)四、实验组织运行要求采用