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1、P-ERK在COPD大鼠肺气肿形成中的表达研究摘要：目的探讨在COPD大鼠肺气肿形成过程中肺组织磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)的表达变化。方法30只大鼠随机分为对照组、21d组、28d组，每只各10只。采用香烟烟熏联合气管内注入脂多糖的方法建立COPD模型。分别于21d、28d用图像分析系统测定肺泡平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN),用免疫组化法测定肺组织中p-ERK的表达。结果MLI、MAN、肺组织p-ERK表达在21d组(70.38±7.14X10—6m,125.64±5.41个/m2,0.2
2、45±0.020)、28d组(96.76土9.07X10-6m,91.02±9.22个/m2,0.341±0.038)分别与对照组(47.76±4.27X10-6m,154.61±6.40个/n)2,0.120±0.021)相比有显著性差异(P<0.01)；21d组、28d组MLI与肺组织p-ERK呈正相关(分别r=0.770,P<0.01)；21d组、28d组MAN与肺组织p-ERK呈负相关(分别r=-0.753,P<0.01)o结论p-ERK在肺组织表达的增高，可能是COPD肺气肿形成的重要因素之一。关键词：磷
3、酸化的细胞外信号调节激酶；肺疾病；阻塞性；肺气肿肺气肿是慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD)重要的病理特征之一，英发病机制不完全明确，与炎症反应、蛋口酶-抗蛋口酶失衡等密切相关［1］。细胞外信号调节激酶(ertracellular-signalregulatedkinase,ERK)属于丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)家族，是体内多条信号转导途径的汇集点［2］,可以介导氧化应激的发生，炎症细胞、
4、炎性介质的产牛以及蛋白酶的增加等。P-ERK作为ERK的活化形式，目前还未见与COPD肺气肿关系的相关报道。因此，观察在COPD大鼠肺气肿形成过程中肺组织p-ERK的表达，可能为防治COPD肺气肿形成提供新的研究思路。1资料与方法1.1一般资料脂多糖(LPS)(菌属055：B5),北京博奥森生物技术有限公司；〃天下秀〃牌香烟(焦油量:llmg,烟气烟碱量:l.Omg),川渝中烟工业有限责任公司；RabbitAnti-phospho-ERKl/2(Thr202+Tyr204)antibody(bs-3016R),北京
5、博奥森生物技术有限公司；雄性SD大鼠30只，体重(210±20)g,西南医科大学实验动物中心提供；有机玻璃烟熏箱，口制；真彩色医学图像分析系统BI-2000,成都泰盟电子有限公司。1・2方法选取30只雄性SD大鼠随机分为三组，对照组：10只，呼吸正常空气及饲养4w,于第1、15d气管内注入生理盐水200u1o28d组参照顾延会［3］的造模方法，在第1、15d经气管注入200ulLPS(200ug/200ul),其余时间将大鼠放入机玻璃烟熏箱内烟熏天下秀牌香烟，2次/d,30min/次，香烟12支/次，烟熏至少间隔2
6、h/次。21d组制备方法同28d组。1.3肺组织标本处理分别处死各组大鼠，取左肺下叶，用4%多聚甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，切片，分别行HE染色、免疫组化染色。在显微镜200倍下观察IIE染色的肺组织切片，随机选取左、中、右、上、下五个视野进行测量。标记通过各个视野中央〃十〃字交叉线的肺泡间隔数(Ns),测出十字交叉线的总长度(L),采用L/Ns表示各个视野肺泡平均内衬间隔(MLI),反映肺泡的直径大小。标记出每个视野内的肺泡数（Na）,测出各个视野的面积（S）,采用Na/S表示各个视野的平均肺泡数（MAN）
7、,反映肺泡的密度改变。检测免疫组化染色切片的随机3个视野肺组织P-ERK相对阳性表达强度，计算p-ERK平均吸光度值（A值）。1.4统计学处理采用SPSS17.0统计学分析，数据用均数土标准差（x±s）表示，多组均数采用单因素方差检验。Pearson直线相关分析数据相关性，P<0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1HE染色结果由图1〜3可见，对照组（图1）肺泡结构正常。21d组（图2）肺泡腔大小不一，少许肺泡壁断裂，周围可见部分炎细胞浸润。28d组（图3）肺泡壁断裂、肺泡融合、肺泡腔不规则的扩大，周围可见大量炎
8、性细胞浸润。由表1可见，28d组与对照组比较，MLI明显升高，MAN明显降低（均P〈0.01）；21d组与28d组比较，MLI明显降低,MAN明显升高（均P<0.01）o图1〜3大鼠肺泡病理学改变（IIEX200）：对照组（图1）、21d组（图2）、28d组（图3）。2.2免疫组化结果由图4〜6可见，p-ERK主要表达在支气管内皮细胞、平滑肌细胞、肺泡上皮细
