95d细胞转移相关基因在原发灶,循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达

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1、95D细胞转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达李雪涛，陈芳琳，王欣欣，孙建国，陈正堂（400037重庆，第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所）[摘要]目的利用人巨细胞肺癌高转移株95D裸鼠自发转移模型，分析CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B等肿瘤转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达。方法根据前期实验结果并利用GoSufer软件进行GO(geneontology)分析，筛选出可能与肿瘤转移相关的基因CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B。利用稳定表达绿色荧光蛋

2、白（GFP）的人巨细胞肺癌细胞株95D/GFP，建立肺癌裸鼠自发转移模型，用流式细胞分选术（fluorescence-activatedcellsorting，FACS）分别纯化原发灶、外周血和转移灶中的肿瘤细胞，利用Real-timePCR技术检测上述基因在上述肿瘤细胞中的相对表达量。结果CD9、RHOA、MYL12A基因在循环血肿瘤细胞（circulatingtumorcellsCTCs）中表达较少，其次是肝转移灶，在皮下原发灶中表达较多；B2M基因在皮下原发灶、循环血肿瘤细胞和肝转移灶中依次降低；PTOV1基因在CTCs中高表达，其次是皮下

3、原发灶，肝转移灶中表达最少；HSPA1B基因只在原发灶中表达。结论CD9、RHOA、MYL12A、B2M、HSPA1B基因可能是潜在的肺癌转移抑制基因，而PTOV1可能促进肺癌微转移。[关键词]人巨细胞肺癌；荧光示踪技术；循环肿瘤细胞；荧光定量PCR[中图法分类号]R394.3；R734.2；R730.22[文献标志码]ADifferentialexpressionofthemetastasis-associatedgenesin95Dcellsinprimarytumor,circulatingtumorandmetastaticfociLiX

4、uetao，ChenFanglin，WangXinXin，SunJianguo，ChenZhengtang(CancerResearchCenter，XinqiaoHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400037，China)[Abstract]ObjectiveToanalyzethedifferentialexpressionofthemetastasis-associatedgenes(CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B)inprimarytumor

5、、circulatingtumorcells(CTCs)andmetastaticfocibyusing95Dcelllinetoestablishaxenograftlungcancermodelinnudemicewithspontaneousmetastasis.MethodsAccordingtopreviousexperimentaldata，weselectmetastasis-associatedgenes(CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B)andestablishaxenograftlungcanc

6、ermodelinnudemicewithspontaneousmetastasisbyusing95DcelllinewhichstablyexpressingGFP(Greenfluorescentprotein)，andpurifythetumorcellsinthesubcutaneousprimarytumor,thecirculatingtumorcells(CTCs)andthemetastaticfocibyFACS(fluorescence-activatedcellsorting).Finally，wecomparethere

7、lativeexpressionsofthemetastasis-associatedgenesbyRealtime-PCR.ResultsExpressionsofCD9、RHOA、MYL12AintheCTCsisthelowestandexpressionintheprimarytumoristhehighest.Differentfromthem,however,expressionofPTOV1inCTCsisthehighest.B2Mexpressionreducesinturninsubcutaneousprimarytumor,

8、theCTCsandthemetastaticfoci.Especially,HSPA1Bexpressesinthesubcutane