乙肝基因检测及其临床意义

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1、乙型病毒性肝炎的基因检测及其临床意义提要：目的：通过対乙肝基因检测的阐述及其与其他方法学的对比，凸显其在乙肝治疗的重要性。方法：乙肝病毒基因定量检测及免疫胶体金法检测。结果：基因检测灵放度高，nJ'判断病毒是否处于复制期，且其结果数值可肓接反应病毒复制状况。结论：乙肝基因检测对乙肝患者的治疗有极其关键的指导作用。关键字:HBVPCRHBV-DNAIIBV感染人体后，可从血中测得抗原和抗休类物质，称为血清标志物；同时，也可测出病毒的基因组核酸或其它相关核酸，如HBV-DNA和HBV-DNAp,称为分子标志物；这些标总物的存在和变化，反映病毒在

2、宿主中的状态和病情的发展情况，是病毒性肝炎的重要实验室诊断依据。HBV是乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要致病因素。全球约20亿人为HBV易感人群，3.5亿为慢性HBV感染者，乙肝病毒有8个基因型，其中中国有4个基因型。1.关于乙肝病毒的介绍1.1乙肝病毒的特点1.1.1HBV的基因变异性HBV是极度变片的病毒之一，变片是病毒的特性，往往给临床诊断带來一定的困难。1.1.2HBV的嗜肝性HBV的一旦进入人体只侵袭肝脏。1.1.3HBV的感染的慢性化rti于乙肝不能彻底的根治，长期下來多转为慢性乙肝这个过程可达儿十年，所以它是一个重要的传染源。

3、1.1.4HBV的致癌性目前可以肯定HBV是诱发肝癌的重要病因，有80-90%的肝癌患者有乙肝病史。1.1.5HBV具有顽强的抵抗力能耐受低温、紫外线、干燥和一般消毒剂。100C°10分钟高压蒸汽灭菌,0.5的过氧乙酸等能使HBV灭活。1.1.6HBV具有严格的种属特点HBV仅在人或黑猩猩身上生存。1.2乙肝病毒的基因组成HBV基因组为双链不完全环状DNA,由3200个核苜酸组成，其负链包插四个开放读框架区：1、S基因区，由S基因、前S2基因(Pre-S2)和前S1基因(Pre-S1)组成，分别编码IlBsAgs前S2和前S1蛋口或抗原(P

4、re-S2Ag和Pre-SlAg)。2、C基因区,由前C基因和C基因组成，分别编码HBoAg和HBcAgo3、P基因区，编码乙型肝炎病毒相关DNA聚合陆(DNAp)，其具有逆转录酶活性。4、X基因区，编码乙肝病毒X抗原，具有激活HBcAg基因的功能。2.乙肝病毒检测及定量检测的临床意义HBV-DNA是乙肝病毒的核心成分，是病毒复制及有传染性的标志，是病毒感染的最直接、特异和灵敏指标。急性乙肝时，HBV-DNA阳性超过8周可变慢性。在慢性感染时HBV-DNA可结合到肝细胞DNA中,称为整合型HBV-DNA,如HBV病毒基因已整合至宿主基因，治

5、疗药物则难以到达，这是HBV不易从体内清除的重要原因之一。PCR法检测HBV-DNA,既可以定性，乂可以定量，其临床应用有：2.1病情评估肝炎病毒在肝细胞内大量复制是导致肝细胞免疫损伤的启动因素。血清HBV-DNA含量高低与肝脏病理损害程度相关，HBV-DXA水平越高，肝组织炎症反应越重。据此,通过定量检测HBV-DNA含量可以间接评估慢性肝炎患者肝脏损伤的情况。2.2疗效观察用抗病毒药物治疗慢性病毒性肝炎，治疗前病毒基因水'匕愈高，疗效越羌；水'卜愈低清除病毒可能性越大。相应地，在治疗过程中，病毒基因水平卜•降愈快，完全治愈的机会越人。因

6、此可将肝炎病毒基因检测作为预测和观察抗病壽疗效的一种手段。2.3预后判断①治疗或未经治疗的慢性病毒性肝炎，病毒基因水平保持稳定高浓度者预后不良；②垂直传播途径感染肝炎病毒者，病毒基因含量高，对各种抗病毒治疗的反应低，预后差；③病程中，尽管反映肝细胞损害的其它指标正常，但病毒基因水平经常波动者易发展为肝硬化。2.4药效验证：任何一种抗病壽药物对肝脏的损害都是很大的。治疗后定虽:PCR可直接准确地测定体内病毒数量，有助于疗效的判断，指导临床合理川药。所以说HBV-DNA定量检测指标在乙肝治疗中冇着非常重要的意义，一般以定虽检测1.0E3以下为阴

7、性，以上为阳性。阳性提示体内病毒复制活跃，血液中含量高，传染性较强；阴性则相反，病毒复制己得到抑制，血液中含量底，传染性弱。只有体内的HBV-DNA定虽指标降低，病毒的复制繁殖才会停止，乙肝的彻底治愈才有希望。1.HBV的定量检测方法及其原理1.1PCR的介绍口Mullis1983年发明聚合卿链反应（PCR）这种核酸扩增技术以來，它已深入到生命科学研究的每一个角落，且派生出了各种各样的有其独特使用目的的核算扩增检测技术。到20世纪90年代屮期，国内的临床实验室将PCR技术广泛地用于HBV的临床检测。3.2PCR技术的基本原理类似于DNA的天

8、然复制过程，其特界性依赖于与靶序列两端互补的寡核昔酸引物。PCR由变性--退火一延伸三个基本反应步骤构成。3.2.1模板DNA的变性模板DNA经加热至93°C左右一定时间后，使模